%A 史宗畔, 冉永红, 张晶晶, 张静, 闫振天, 陈斌, 何正波 %T 中华按蚊气味结合蛋白AsinOBP1与避蚊胺(DEET)的结合特性分析 %0 Journal Article %D 2018 %J 昆虫学报 %R 10.16380/j.kcxb.2018.01.015 %P 139-148 %V 61 %N 1 %U {http://www.insect.org.cn/CN/abstract/article_6136.shtml} %8 2018-01-20 %X   【目的】研究中华按蚊Anopheles sinensis气味结合蛋白1 (AsinOBP1)与避蚊胺(N, N-diethyl-m-toluamide, DEET)的结合特性,并与埃及伊蚊Aedes aegypti AaegOBP1、致倦库蚊Culex quinquefasciatus CquiOBP1进行比较,分析与DEET互作的关键氨基酸残基。【方法】利用原核表达载体进行目的蛋白AsinOBP1的原核表达及纯化。以N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine, 1-NPN)作为荧光探针,通过荧光竞争结合实验对AsinOBP1与DEET的结合特性进行分析,并比较AsinOBP1, AaegOBP1和CquiOBP1与DEET的结合能力,通过分子对接鉴定其与DEET互作的氨基酸残基。【结果】AsinOBP1能与DEET结合,解离常数为29.55 μmol/L。在相同实验条件下,CquiOBP1和AaegOBP1都能结合DEET,解离常数分别为17.15和12.81 μmol/L。与AaegOBP1和CquiOBP1相比,AsinOBP1结合DEET的能力最弱,AaegOBP1最强。分子对接显示,DEET分子结合在AsinOBP1二聚体靠近交界面的结合口袋边缘,结合口袋由α4, α5和α6上的氨基酸残基Leu-92, Leu-95, His-96, Leu-99, Ala-107, Met-108, Met-110, Gly-110, Cys-114, Leu-115, Trp-133, Met-108′, Lys-112′和Leu-115′组成。比较分析发现3个蛋白中与DEET甲苯基团形成疏水性作用的氨基酸残基、与DEET羰基氧形成氢键的氨基酸残基是相同的,但与DEET二乙基侧链形成疏水性作用的氨基酸残基中,有一个位置存在差异,AaegOBP1是Leu,而AsinOBP1和CquiOBP1是Met残基。Leu的疏水性强于Met,可能是AaegOBP1与DEET的结合能力较强的原因之一。【结论】AsinOBP1能够结合DEET,不同蚊虫气味结合蛋白1与DEET的亲和力存在差异,进一步探索这些差异形成的原因对于阐明气味结合蛋白与DEET互作的模式具有重要的参考价值。