家蚕溶茧酶基因的真核表达及其产物的生物活性检测

›› 2008, Vol. 51 ›› Issue (5): 466-472.

家蚕溶茧酶基因的真核表达及其产物的生物活性检测

吴玉丹，李兵，王文兵，王东，沈卫德

出版日期:2010-07-27 发布日期:2008-05-20
通讯作者: 沈卫德

Eukaryotic expression of the cocoonase gene from Bomb yx mori and biological activities of the expressed product

WU Yu-Dan

Online:2010-07-27 Published:2008-05-20

摘要/Abstract

摘要：

为了研究家蚕 Bombyx mori 溶茧酶基因（cocoonae）真核表达及其产物的生物活性，将溶茧酶基因（GenBank 登录号 EF428980）克隆至杆状病毒转移载体 pFastBac^TM 1 中获得 pFast-cocoonase，将其转化 DH10Bac 感受态细胞后，PCR 方法检测证实所分离的重组病毒 DNA 中含有目的片段溶茧酶基因。用脂质体法转染家蚕 BmN 细胞，获得重组病毒。SDS-PAGE 分析显示，感染重组杆状病毒 Bac-cocoonase 的细胞表达产物在约为 27.6 kD 处出现特异性条带，这与预测的蛋白大小相符。用该表达产物与茧丝反应后，电镜下观察茧丝的形态，结果表明表达产物对茧丝的丝胶层有一定的水解作用。

关键词: 家蚕, 溶茧酶基因, 真核表达, 杆状病毒系统, Bac-to-Bac 系统

Abstract: In order to research the biological activity of cocoonase expressed through eukaryotic expression system, cocoonase gene (GenBank accession number: EF428980) was cloned into baculovirus transfer vector pFastBac^TM1 to obtain pFast-cocoonase, and this recombinant vector was then transformed into DH10Bac competent cells. Cocoonase gene was verified to have been successfully transferred to recombinant bacmid by PCR. BmN cells were transfect ed with the recombinant bacmid through lipofectin mediated method to obatin rec ombinant baculovirus. SDS-PAGE analysis showed that a specific band of about 27.6 kD existed on the lane of expression products of recombinant baculovirus, which was consistent with predicted size of the target protein. SEM micrographs were taken after treating silkworm silk with the expressed protein, and the results s howed that the expressed protein could hydrolyze sericine to some extent.

Key words: Bombyx mori, cocoonase, eukar yotic expression, baculovirus system, Bac-to-Bac system

吴玉丹，李兵，王文兵，王东，沈卫德. 家蚕溶茧酶基因的真核表达及其产物的生物活性检测[J]. , 2008, 51(5): 466-472.

WU Yu-Dan. Eukaryotic expression of the cocoonase gene from Bomb yx mori and biological activities of the expressed product[J]. , 2008, 51(5): 466-472.

[1]	张祥乐, 马俐, 马倩, 李胜, 刘素宁. Ras信号通路通过激活转录因子Myc促进核内复制细胞生长[J]. , 2018, 61(8): 885-894.
[2]	孟竹, 文茂羽, 康晓丽, 卢忠燕, 赵萍, 夏庆友. 饥饿胁迫对家蚕糖脂代谢的影响及BmFoxO的作用[J]. , 2018, 61(8): 895-904.
[3]	殷娅茹, 胡建, 胡文波, 杨成飞, 王坤, 刘春, 林英, 朱勇, 王凌燕. 家蚕油蚕oc突变体突变基因的精细定位[J]. , 2018, 61(6): 627-636.
[4]	朱娟, 谢雨辰, 陈艳荣, 唐顺明, 易咏竹, 沈兴家. 家蚕滞育关联山梨醇脱氢酶基因的启动子活性分析[J]. , 2018, 61(4): 391-397.
[5]	龙定沛, 郝占章, 向仲怀, 赵爱春. 家蚕基因组靶向编辑技术研究进展 [J]. , 2018, 61(3): 371-384.
[6]	申利, 许川, 张蕾, 张奎, 毛景欣, 潘光照, 李重阳, 胡仁建, 杨丽群, 崔红娟. 家蚕C类清道夫受体BmSR-C的基因克隆、原核表达及亚细胞定位[J]. , 2018, 61(10): 1132-1144.
[7]	杨娟娟, 王远卓, 魏博帆, 邢秋婷, 阚云超, 乔惠丽. 家蚕miR-301对化学感受蛋白基因csp9表达的调控[J]. , 2018, 61(10): 1145-1152.
[8]	唐芬芬, 张永红, 邵榆岚, 朱峰, 白兴荣. 云南家蚕核型多角体病毒分离株的毒力测定及系统进化分析[J]. , 2018, 61(10): 1160-1169.
[9]	马行洲, 李飞. miRNA调控昆虫精巢干细胞自我更新相关基因的保守性分析和靶标验证[J]. , 2017, 60(8): 847-856.
[10]	崔乐, 程瑞, 姜楠. 中国无蚬蛾科分布——“蒲公英蚬蛾”实为一种蚕蛾[J]. , 2017, 60(6): 731-734.
[11]	唐芬芬, 郑亚强, 白兴荣, 陈斌. 短时热激后家蚕对核型多角体病毒的抗性及相关抗菌肽和热激蛋白基因表达水平的变化[J]. , 2017, 60(5): 505-512.
[12]	杨基贵, 彭丽娜, 刘太行, 吴云飞, 杜国玉, 张倩, 王炜, 潘敏慧. 家蚕Sox家族基因BmDichaete的克隆与表达分析[J]. , 2017, 60(5): 513-522.
[13]	廖文丽, 卜晓玲, 江婉仪, 刘吉升. 脂多糖对家蚕幼虫Toll样受体基因BmToll9-2表达的影响[J]. , 2017, 60(4): 372-378.
[14]	包希艳, 陈鹏, 刘太行, 王腊, 刘文波, 潘敏慧, 鲁成. 家蚕凋亡相关基因研究进展[J]. , 2017, 60(4): 487-498.
[15]	Thangaraj PRATHEEP, Neelamegam RAMESHKUMAR, Nagarajan KAYALVIZHI, Thangaiyan SUGANYA, Sivashanmugam KARTHIKEYAN Muthukalingan KRISHNAN. 家蚕末龄幼虫、蛹和成虫期载脂蛋白组成的变化 (英文)[J]. , 2017, 60(3): 247-253.