摘要: 昆虫消化道内是一个复杂的微生态系统, 有大量的微生物存在。这些微生物对寄主发育、 营养吸收和防御方面都起着重要的作用。本文利用基于16S rRNA基因的PCR-RFLP指纹图谱法和变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)的方法对柑桔黄龙病虫-媒柑桔木虱Diaphorina citri体内细菌菌群多样性进行了研究。经PCR-RFLP分析显示31条序列与变形菌门的假单胞菌科、肠杆菌科、黄单胞菌科、伯克氏菌科、立克次氏菌科和根瘤菌科细菌具有较高同源性。柑桔木虱内共生细菌的优势菌群依次为合胞体共生菌(syncytium endosymbiont)(同源性99%, 5条序列, 分离频率31%)、 Candidatus Carsonella ruddii和Mycetocyte 内共生菌(同源性98%, 5条序列, 分离频率31%)以及亚洲韧皮杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)和内共生菌Wolbachia。对柑桔木虱内生细菌16S rDNA V3区序列的PCR-DGGE分析, 条带相似性的UPMAGA聚类分析表明, 采自九里香Murraya paniculata的柑桔木虱内生细菌大多聚为一支, 而来自柑桔的聚在另一支, 说明寄主差异对柑桔木虱内生细菌菌群构成的影响大于地理位置的影响。将PCR-DGGE条带测序, 序列经GenBank序列比对发现柑桔木虱内生细菌主要属于变形菌门假单胞菌科、 立克次氏菌科、 肠杆菌科、 黄单胞菌科以及厚壁菌门链球菌科和芽孢杆菌科。合胞体共生菌(条带3-4)因其稳定存在于木虱体内且不随柑桔木虱寄主和地理位置的改变而变化, 可能是柑桔木虱体内的优势共生菌; 内共生细菌Wolbachia也在柑桔木虱内稳定存在, 表明我国柑桔木虱感染Wolbachia是普遍现象。PCR-RFLP和PCR-DGGE两种方法相结合较好地反映了柑桔木虱内生细菌菌群的多样性, 而且均显示出柑桔木虱内的合胞体共生菌是主要的优势菌群。