家蚕和野桑蚕脂肪酸脱氢酶desat4全长cDNA和启动子的克隆及其原核表达

›› 2012, Vol. 55 ›› Issue (8): 885-894.doi:

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家蚕和野桑蚕脂肪酸脱氢酶desat4全长cDNA和启动子的克隆及其原核表达

陈全梅, 程道军, 马振刚, 胡晓明, 查幸福, 赵萍

收稿日期:2012-04-06 修回日期:2012-08-02 出版日期:2012-09-20 发布日期:2012-08-20
通讯作者: 赵萍 E-mail:zhaop@swu.edu.cn
作者简介:陈全梅，女， 1986年生，重庆人，博士研究生，研究方向为生物化学与分子生物学, Tel.: 023-68250748; E-mail: chenquan@swu.edu.cn

Cloning of full-length cDNA and promoter sequences of fatty acid desaturase gene desat4 from silkworms, Bombyx mori and B. mandarina, and its prokaryotic expression

CHEN Quan-Mei, CHENG Dao-Jun, MA Zhen-Gang, HU Xiao-Ming, CHA Xing-Fu, ZHAO Ping

Received:2012-04-06 Revised:2012-08-02 Online:2012-09-20 Published:2012-08-20
Contact: ZHAO Ping E-mail:zhaop@swu.edu.cn
About author:chenquan@swu.edu.cn

摘要/Abstract

摘要： 【目的】获得家蚕Bombyx mori和野桑蚕Bombyx mandarina脂肪酸脱氢酶基因 desat4的cDNA及其启动子序列，并应用原核表达系统获得目的蛋白质，为进一步研究该基因的功能提供基础。【方法】利用RACE技术克隆家蚕和野桑蚕desat4基因全长cDNA序列，基于家蚕全基因组序列设计引物克隆它们的启动子，并采用原核表达技术对该基因进行异源表达。【结果】克隆得到家蚕与野桑蚕desat4 基因全长cDNA，长度分别为1 717 bp 和1 718 bp， ORF长度为1 059 bp，编码352个氨基酸残基，结构上有3个组氨酸保守区和4次跨膜结构域，说明该蛋白质是膜蛋白。同源性分析发现Desat4 氨基酸序列与烟草天蛾Manduca sexta MsexKPSE脱氢酶拥有88.9%相似性。克隆获得的家蚕和野桑蚕desat4基因启动子序列长度分别为1 808 bp和870 bp，该区域包含有热休克因子HSF（heat-hock factor）结合位点、NIT2结合位点和CdxA(caudal type homeobox transcription factor A)结合位点等等，并未发现有典型的TATA-box，但在靠近5′-UTR区域发现了转录起始因子特征序列。时期表达谱分析显示desat4基因从刚产下卵到成虫（蛾）的36个不同发育时间点都有持续稳定的表达。应用原核表达系统成功地表达了Desat4蛋白质，并用温和变性剂十二烷基-β-D-麦芽吡喃糖苷（dodecyl-β-D-maltoside, DDM) 就能很好地促进该蛋白质的溶解。【结论】本研究成功地克隆了家蚕和野桑蚕desat4基因全长cDNA及其启动子序列并进行了序列比对分析，构建了desat4基因的原核表达载体并成功表达，为进一步研究该基因的功能提供参考。

关键词: 家蚕, 野桑蚕, 脂肪酸脱氢酶, 全长cDNA, 启动子, 原核表达

Abstract: 【Aim】 The main aim of this research was to clone and align the full-length cDNA and promoter sequences of desat4 gene from silkworms, Bombyx mori and B. mandarina, and construct prokaryotic expression vector to obtain a membrane protein Desat4 for further functional study. 【Methods】 Full-length cDNA of the desat4 gene from silkworm was obtained through RACE technique, the encoded protein was expressed in Escherichia coli expression system, and its promoter sequences were cloned based on genome sequences of silkworm. 【Results】 The full-length cDNA of the desat4 gene from B. mori and B. mandarina was 1 717 bp and 1 718 bp, respectively. Their open reading frame (ORF) is 1 059 bp in length and encodes 352 amino acid residues with four transmembrane helixes and three conserved histidine clusters, which are essential for desaturase catalytic activity. The deduced amino acid sequence shares 88.9% similarity to that of the fatty acid desaturase MsexKPSE (GenBank no. CAJ27975) of Manduca sexta. There is no typical TATA-box in promoter sequences, but there is a transcriptional initiator as well as other transcription factor binding sites, including HSF, NIT2, CdxA and so on. The membrane protein Desat4 was expressed in E. coli expression system and solubilized with mild detergent DDM. 【Conclusion】 The full-length cDNA and promoter sequences of desat4 gene from B. mori and B. mandarina were successfully cloned and comparatively analyzed. The membrane protein was expressed in vitro by pET system, thus providing a foundation for further functional study.

Key words: Bombyx mori, Bombyx mandarina, fatty acid desaturase, fulllength cDNA, promoter, prokaryotic expression

陈全梅, 程道军, 马振刚, 胡晓明, 查幸福, 赵萍. 家蚕和野桑蚕脂肪酸脱氢酶desat4全长cDNA和启动子的克隆及其原核表达[J]. , 2012, 55(8): 885-894.

CHEN Quan-Mei, CHENG Dao-Jun, MA Zhen-Gang, HU Xiao-Ming, CHA Xing-Fu, ZHAO Ping. Cloning of full-length cDNA and promoter sequences of fatty acid desaturase gene desat4 from silkworms, Bombyx mori and B. mandarina, and its prokaryotic expression[J]. , 2012, 55(8): 885-894.

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[1]	张祥乐, 马俐, 马倩, 李胜, 刘素宁. Ras信号通路通过激活转录因子Myc促进核内复制细胞生长[J]. , 2018, 61(8): 885-894.
[2]	孟竹, 文茂羽, 康晓丽, 卢忠燕, 赵萍, 夏庆友. 饥饿胁迫对家蚕糖脂代谢的影响及BmFoxO的作用[J]. , 2018, 61(8): 895-904.
[3]	殷娅茹, 胡建, 胡文波, 杨成飞, 王坤, 刘春, 林英, 朱勇, 王凌燕. 家蚕油蚕oc突变体突变基因的精细定位[J]. , 2018, 61(6): 627-636.
[4]	孙佳斌, 刘乃勇, 李双美, 闫祺, 董双林. 斜纹夜蛾信息素结合蛋白SlitPBP4的分子克隆、组织表达谱及结合特性分析[J]. , 2018, 61(6): 657-667.
[5]	朱娟, 谢雨辰, 陈艳荣, 唐顺明, 易咏竹, 沈兴家. 家蚕滞育关联山梨醇脱氢酶基因的启动子活性分析[J]. , 2018, 61(4): 391-397.
[6]	程杏安, 林贤伟, 蒋旭红, 刘展眉, 钟国华, 胡美英. 草地贪夜蛾组织蛋白酶L的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备[J]. , 2018, 61(4): 410-422.
[7]	柳小龙, 张宾, 田浩楷, 宁静, 王海香, 赵莉蔺. 松墨天牛Mfe2基因的克隆、原核表达和表达谱分析[J]. , 2018, 61(3): 282-291.
[8]	童晓玲, 石津, 盖停停, 方春燕, 代方银. 昆虫启动子的研究及应用[J]. , 2018, 61(3): 360-370.
[9]	龙定沛, 郝占章, 向仲怀, 赵爱春. 家蚕基因组靶向编辑技术研究进展 [J]. , 2018, 61(3): 371-384.
[10]	申利, 许川, 张蕾, 张奎, 毛景欣, 潘光照, 李重阳, 胡仁建, 杨丽群, 崔红娟. 家蚕C类清道夫受体BmSR-C的基因克隆、原核表达及亚细胞定位[J]. , 2018, 61(10): 1132-1144.
[11]	杨娟娟, 王远卓, 魏博帆, 邢秋婷, 阚云超, 乔惠丽. 家蚕miR-301对化学感受蛋白基因csp9表达的调控[J]. , 2018, 61(10): 1145-1152.
[12]	唐芬芬, 张永红, 邵榆岚, 朱峰, 白兴荣. 云南家蚕核型多角体病毒分离株的毒力测定及系统进化分析[J]. , 2018, 61(10): 1160-1169.
[13]	苗娅, 张甜甜, 许柏英, 陈斌. 中华按蚊谷胱甘肽-S-转移酶E6（AsGSTE6）的表达纯化与结晶[J]. , 2018, 61(1): 59-67.
[14]	谭永安, 赵旭东, 肖留斌, 孙洋, 赵静, 柏立新, 郝德君. 绿盲蝽核受体基因AlE75D的克隆和性质分析[J]. , 2017, 60(9): 984-993.
[15]	马行洲, 李飞. miRNA调控昆虫精巢干细胞自我更新相关基因的保守性分析和靶标验证[J]. , 2017, 60(8): 847-856.

家蚕和野桑蚕脂肪酸脱氢酶desat4全长cDNA和启动子的克隆及其原核表达

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