二斑叶螨抗螺螨酯品系GST基因的克隆与表达分析

›› 2013, Vol. 56 ›› Issue (4): 438-445.doi:

二斑叶螨抗螺螨酯品系GST基因的克隆与表达分析

吕娟娟¹, 王进军², 张寿芳¹, 沈慧敏^1,*

（1. 甘肃农业大学草业学院，草业生态系统省部共建教育部重点实验室，中-美草地畜牧业可持续发展中心，
兰州 730070; 2. 西南大学植物保护学院，昆虫学及害虫控制工程重点实验室，重庆 400716）

出版日期:2013-04-20 发布日期:2013-04-20

Cloning and expression profiling of glutathione Stransferase genes in the spirodiclofen-resistant strain of Tetranychus urticae

LÜ Juan-Juan¹, WANG Jin-Jun², ZHANG Shou-Fang¹, SHEN Hui-Min^1,*

(1. SinoU.S. Centers for Grazingland Ecosystem Sustainability, Key Laboratory of Grassland Ecosystem Education Ministy, College of Prataculture, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China; 2. Key Laboratory of Entomology and Pest Control Engineering, College of Plant Protection, Southwest University, Chongqing 400716, China)

Online:2013-04-20 Published:2013-04-20

摘要/Abstract

摘要： 【目的】揭示二斑叶螨Tetranychus urticae对螺螨酯的分子抗性机理。【方法】利用RT-PCR克隆了二斑叶螨的谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione S-transferase, GST)基因 cDNA 全长序列，采用生物信息学软件分析了克隆基因的编码蛋白特性；利用实时荧光定量PCR 方法分析GST基因在二斑叶螨的螺螨酯抗性与敏感品系中的表达差异。【结果】克隆获得的谷胱甘肽-S-转移酶2个基因分别被命名为TuGSTd1和TuGSTd2 (GenBank登录号分别为： KC445659和KC445660)。序列分析发现， TuGSTd1的开放阅读框长度为648 bp，编码215个氨基酸，分子量约为24.47 kDa，理论等电点为5.49； TuGSTd2的开放阅读框为648 bp，编码215个氨基酸，分子量约为24.57 kDa，理论等电点为6.33。系统发育分析表明这两个基因与桔全爪螨Panonychus citri Delta家族的GST基因的氨基酸序列一致性为93%。实时荧光定量PCR 结果表明， TuGSTd1和TuGSTd2在二斑叶螨抗螺螨酯品系中的相对表达量分别为敏感品系的5.60和3.75 倍。【结论】 GST基因在二斑叶螨抗螺螨酯品系中的相对表达量均显著高于敏感品系, 据此推测GST基因的过量表达可能与其对螺螨酯的抗性形成有关。

关键词: 二斑叶螨, 抗螺螨酯品系, GST, 基因克隆, 表达量, 荧光定量PCR

Abstract: 【Aim】 In order to clarify the resistance mechanism of Tetranychus urticae to spirodiclofen at the molecular level. 【Methods】 The full-length cDNAs of GST genes of T. urticae were cloned by RT-PCR, the structure and function of the coded proteins were analyzed by bioinformatic software, and the expression levels of GST genes in the spirodiclofen-resistant (Sp-R) and susceptible (SS) strains of T. urticae were assayed by quantitative real-time PCR. 【Results】 Two GST genes were cloned and named as TuGSTd1 and TuGSTd2, which were deposited in GenBank under the accession no. KC445659 and KC445660, respectively. The open reading frame of TuGSTd1 is 648 bp in length, encoding 215 amino acids with the predicted molecular mass of 24.47 kDa and the theoretical pI of 5.49, while that of TuGSTd2 is 648 bp in length, encoding 215 amino acids with the predicted molecular mass of 24.57 kDa and the theoretical pI of 6.33. Phylogenetic analysis showed that these two GST genes have 93% amino acid sequence identity with Delta class GSTs of Panonychus citri. Quantitative real-time PCR showed that the relative expression levels of TuGSTd1 and TuGSTd2 in Sp-R were 5.60 and 3.75 times as high as those in SS, respectively. 【Conclusion】 The relative expression levels of GST genes in Sp-R were higher than those in SS, suggesting that the up-regulated expression of GST genes is probably related with the development of resistance to spirodiclofen in T. urticae.

Key words: Tetranychus urticae, spirodeclofen-resistant strain, glutathione S-transferase (GST), gene cloning, expression level, real-time fluorescent quantitative PCR

吕娟娟, 王进军, 张寿芳, 沈慧敏. 二斑叶螨抗螺螨酯品系GST基因的克隆与表达分析[J]. , 2013, 56(4): 438-445.

Lü Juan-Juan, WANG Jin-Jun, ZHANG Shou-Fang, SHEN Hui-Min . Cloning and expression profiling of glutathione Stransferase genes in the spirodiclofen-resistant strain of Tetranychus urticae[J]. , 2013, 56(4): 438-445.

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: http://www.insect.org.cn/CN/

http://www.insect.org.cn/CN/Y2013/V56/I4/438

[1]	杨春红, 郭建洋, 褚栋, 程登发, 万方浩. 漆酶-1基因在烟粉虱MEAM1隐种和温室粉虱中的表达模式比较[J]. , 2018, 61(9): 1019-1028.
[2]	马荣琴, 王林玲, 衡惠, 周泽扬, 李治. 意大利蜜蜂铁蛋白基因AmFer3HCH的克隆及其在温度胁迫下的应答[J]. , 2018, 61(9): 1029-1039.
[3]	单艳敏, 张玉, 霍志家, 庞保平, 孙学涛. 沙葱萤叶甲丝氨酸蛋白酶基因GdSP的克隆及对温度胁迫的响应[J]. , 2018, 61(7): 761-770.
[4]	张晓晨, 冯纪年. 美棘蓟马体内Wolbachia感染的时空分布[J]. , 2018, 61(7): 843-850.
[5]	岳文波, 郅军锐, 刘利, 叶茂, 张向前, 曾广 . 害虫取食和机械损伤对菜豆不同部位叶片防御酶活性的影响[J]. , 2018, 61(7): 860-870.
[6]	李鹏燕, 刘艳萍, 王思威, 孙海滨, 柏建山, 彭刚, 龚雪海. 荔枝蒂蛀虫信息素结合蛋白基因序列及表达分析[J]. , 2018, 61(5): 527-536.
[7]	司品法, 周琼, 崔中翌 . 柑橘大实蝇气味结合蛋白基因BminOBP25的克隆、原核表达及组织表达分析[J]. , 2018, 61(5): 537-545.
[8]	岳金金, 马宇驰, 刘全, 姜莉莉, 费东亮, 张鹤, 孙莉, 李明, 马鸣潇. 中华蜜蜂半乳糖凝集素AcGalectin的表达、纯化及性质分析[J]. , 2018, 61(5): 546-554.
[9]	程杏安, 林贤伟, 蒋旭红, 刘展眉, 钟国华, 胡美英. 草地贪夜蛾组织蛋白酶L的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备[J]. , 2018, 61(4): 410-422.
[10]	郗学鹏, 魏伟, 张卫星, 王红芳, 胥保华. 中华蜜蜂转录因子AP-1基因的克隆及特性分析[J]. , 2018, 61(4): 423-431.
[11]	陈龙, 谭瑶, 周晓榕, 庞保平, 格希格都仁, 孙志鹏. 沙葱萤叶甲海藻糖酶基因GdTre1的克隆、分子特性和表达分析[J]. , 2018, 61(3): 271-281.
[12]	李鸿波, 戴长庚, 张昌容, 何永福, 胡阳. 粘虫过氧化氢酶基因的克隆与表达分析[J]. , 2018, 61(2): 178-187.
[13]	杨海博, 胡镇杰, 李定旭, 朱品红, 董钧锋. 悬铃木方翅网蝽触角气味结合蛋白基因鉴定[J]. , 2018, 61(10): 1121-1131.
[14]	杨娟娟, 王远卓, 魏博帆, 邢秋婷, 阚云超, 乔惠丽. 家蚕miR-301对化学感受蛋白基因csp9表达的调控[J]. , 2018, 61(10): 1145-1152.
[15]	苗娅, 张甜甜, 许柏英, 陈斌. 中华按蚊谷胱甘肽-S-转移酶E6（AsGSTE6）的表达纯化与结晶[J]. , 2018, 61(1): 59-67.