›› 2015, Vol. 58 ›› Issue (11): 1186-1193.doi:
马卓1,2,# , 刘廷辉1,# , 陈洁1,3, 梁超1, 曹美琳1, 何运转1,*
MA Zhuo 1,2,# , LIU Ting-Hui 1,# , CHEN Jie 1,3 , LIANG Chao 1, CAO Mei-Lin1, HE Yun-Zhun 1,*
摘要: 【目的】为了能准确地追踪异色瓢虫Harmonia axyridis (Pallas)卵黄原蛋白(vitellogenin, Vg)的合成、转运途径和吸收方式,以及卵黄蛋白(vitellin, Vn)在卵母细胞内的积累及分布情况,本研究对异色瓢虫的Vn进行了单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)的制备。【方法】以异色瓢虫Vn免疫BLAB/C小鼠,应用杂交瘤技术,经过3次亚克隆筛选,制备能稳定分泌抗Vn的单克隆抗体。【结果】实验获得4株能够稳定分泌抗异色瓢虫Vn的单克隆抗体,即5E2, 5E11, 1E9和5H8。其中1E9, 5E11和5E2亚型均为IgG1,5H8亚型为IgM。Western blot免疫印迹分析显示,4株单克隆抗体可以特异性地识别Vn,而与雄虫血淋巴无反应。其中,5E2和1E9可以与异色瓢虫抗原的4个亚基发生较强的免疫反应,结合腹水制备前上清效价检测结果最终选取5E2制备单克隆抗体。5E2单克隆抗体的效价为1∶81 000,SDS-PAGE分析显示5E2重链和轻链的分子量分别为50和27 kD。【结论】本实验成功制备出一株能够稳定分泌抗异色瓢虫Vn的单克隆抗体,为建立酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定其动态变化奠定了基础。