【目的】保幼激素受体Methoprene-tolerant (Met)控制保幼激素信号传导途径中重要下游转录因子Krüppel-homolog 1 (Kr-h1)的表达，调控昆虫的变态发育。本研究旨在探究褐飞虱Nilaparvata lugens Met基因与Kr-h1在褐飞虱变态发育中的功能。【方法】利用PCR技术扩增NlMet基因的ORF序列。通过RNA干扰技术分别或同时沉默褐飞虱若虫的NlMet和NlKr-h1基因，进一步研究其功能。【结果】克隆得到NlMet，其开放阅读框包含1 185 bp，编码395个氨基酸，包括bHLH，PAS-A，PAS-B和PAC 4个结构域；其中PAS-B和PAC保守性较高，而bHLH和PAS-A保守性相对较低。采用RNA干扰技术沉默NlMet和NlKr-h1基因后发现，单独对4龄若虫NlKr-h1基因干扰后，若虫阶段及初羽化雌虫和雄虫死亡率均显著上升（P<0.05）；对5龄若虫NlKr-h1基因干扰后只有若虫死亡率上升（P<0.05），单独对NlMet基因干扰后死亡率没有显著变化(P>0.05)；二者共同沉默后的死亡率同单独对NlKr-h1沉默时类似。此外，我们还发现单独对4龄若虫NlKr-h1干扰后在雌虫中出现了生殖器畸形，虽然NlMet干扰并未出现生殖器发育畸形现象，但二者共同干扰后，在若虫、初羽化雌雄成虫中畸形比例均显著增加（P<0.05）。【结论】NlMet与下游转录因子NlKr-h1对褐飞虱变态发育起到重要作用，影响若虫到成虫的变态和外生殖器的发育。本研究有助于揭示NlMet和NlKr-h1在昆虫变态发育中的重要作用。

【目的】分析家蚕Bombyx mori受饥饿胁迫后的蛋白质谱变化，探索其耐受饥饿的机理。【方法】以家蚕品种932为实验材料，利用双向电泳和质谱技术检测5龄起蚕经过24 h饥饿胁迫的蛋白质谱差异变化，利用荧光定量PCR技术分析BmLp-c 6的转录表达。【结果】经比对饥饿蚕和正常取食蚕的血淋巴蛋白谱，饥饿蚕有62个特异蛋白点。蛋白点的等电点在4.22~6.98之间，分子量分布在20.81～144.69 kDa间。选取只在饥饿时出现的特异蛋白点No. 7111进行质谱鉴定，根据其氨基酸序列进行引物设计，获得了目的基因BmLp-c 6，经与载体pET-21d(+)连接重组后，成功获得诱导表达。经实时荧光定量PCR分析，当5龄起蚕受到饥饿胁迫影响时，BmLp-c 6基因在血淋巴中大量转录表达，但在中肠中的转录表达水平却极低。【结论】家蚕5龄起蚕在饥饿胁迫下，血淋巴中的蛋白质谱发生变化，BmLp-c 6会大量转录表达。

【目的】为了更好地了解性信息素结合蛋白（pheromone binding proteins, PBPs）在桃蛀螟Conogethes punctiferalis （Guenée）嗅觉识别过程中的作用，明确其与配体化合物的结合特性。【方法】本研究利用RT-PCR结合RACE方法克隆了桃蛀螟一个性信息素结合蛋白基因；采用Real-time PCR方法分析了该蛋白在桃蛀螟不同发育阶段及雌雄蛾间的表达差异；利用荧光竞争结合实验对Cpun-PBP1蛋白与16种配基化合物的结合特性进行了分析。【结果】克隆了一个桃蛀螟性信息素结合蛋白基因，命名为Cpun-PBP 1（GenBank登录号：KP027486）。Cpun-PBP 1开放阅读框全长510 bp，编码 169个氨基酸，预测分子量为19.12 kDa，等电点为5.09，N-末端包括由起始位置开始的30个氨基酸组成的信号肽。蛋白特征分析显示，该氨基酸序列具有昆虫气味结合蛋白的典型特征，即含有6个保守的半胱氨酸残基。Cpun-PBP 1在桃蛀螟成虫阶段表达量最高，且几乎全部在触角中表达，卵期微量表达，幼虫期和蛹期均不表达。通过构建Cpun-PBP 1原核表达载体，诱导并获得Cpun-PBP 1重组蛋白。荧光竞争结合实验对2种性信息素组分和14种寄主植物挥发物的结合力发现，Cpun-PBP1不但能有效地与桃蛀螟性信息素组分（顺-10-十六碳烯醛和十六醛）结合，结合常数分别为7.32和9.39 μmol/L；还能与8种寄主植物挥发物有效结合；其中，与莰烯的结合能力最强，结合常数为3.76 μmol/L。【结论】根据这些结果，我们推测Cpun-PBP1在桃蛀螟感受性信息素和寄主植物挥发物的过程中发挥着双重作用。

【目的】鉴定出一种新的亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis (Guenée) C型凝集素(C-type lectin)，并对其功能进行初步研究。【方法】通过生物信息学分析，从亚洲玉米螟转录组中筛选得到一个可能的C型凝集素基因，命名为CTL6。利用RT-PCR技术分析该基因在亚洲玉米螟不同龄期、不同组织及不同病原物诱导下的表达模式。借助原核及杆状病毒真核表达系统产生重组CTL6蛋白，并利用细菌凝集实验对其功能进行初步研究。【结果】CTL6基因cDNA全长序列为1 034 nt，其中完整开放阅读框为945 nt。推导的CTL6多肽序列包括314个氨基酸残基，N端含有由22个氨基酸残基组成的信号肽。CTL6成熟肽中含有两个串联的糖识别结构域，与烟草天蛾Manduca sexta的IML-2 (Immulectin-2)同源性最高。RT-PCR结果显示，CTL6在亚洲玉米螟5龄幼虫期转录水平最高，卵期其次，不同组织中则是在脂肪体中转录水平最高，呈诱导性表达。纯化的CTL6重组蛋白对大肠杆菌Escherichia coli具有一定的凝集作用。【结论】鉴定到的亚洲玉米螟CTL6是一种典型的C型凝集素，重组CTL6蛋白可能参与了亚洲玉米螟对病原菌的凝集作用。

【目的】为了能准确地追踪异色瓢虫Harmonia axyridis (Pallas)卵黄原蛋白（vitellogenin, Vg）的合成、转运途径和吸收方式，以及卵黄蛋白（vitellin, Vn）在卵母细胞内的积累及分布情况，本研究对异色瓢虫的Vn进行了单克隆抗体（monoclonal antibody, McAb）的制备。【方法】以异色瓢虫Vn免疫BLAB/C小鼠，应用杂交瘤技术，经过3次亚克隆筛选，制备能稳定分泌抗Vn的单克隆抗体。【结果】实验获得4株能够稳定分泌抗异色瓢虫Vn的单克隆抗体，即5E2, 5E11, 1E9和5H8。其中1E9, 5E11和5E2亚型均为IgG1，5H8亚型为IgM。Western blot免疫印迹分析显示，4株单克隆抗体可以特异性地识别Vn，而与雄虫血淋巴无反应。其中，5E2和1E9可以与异色瓢虫抗原的4个亚基发生较强的免疫反应，结合腹水制备前上清效价检测结果最终选取5E2制备单克隆抗体。5E2单克隆抗体的效价为1∶81 000，SDS-PAGE分析显示5E2重链和轻链的分子量分别为50和27 kD。【结论】本实验成功制备出一株能够稳定分泌抗异色瓢虫Vn的单克隆抗体，为建立酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定其动态变化奠定了基础。

【目的】探索建立一种有效制备昆虫非典型嗅觉受体Orco抗原的方法，为Orco蛋白组织定位及功能研究奠定基础。【方法】设计带有BamH I和Hind III酶切位点的引物，采用RT-PCR方法扩增家蚕Bombyx mori Orco第 4-5跨膜区之间的基因片段，将其与原核表达载体pET-28a(+)双酶切处理后进行连接，然后转化大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞DH5α，重组质粒再转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株，用IPTG诱导表达，用SDS-PAGE检测诱导蛋白，用 HisTrap HP亲和层析对诱导表达的大量蛋白进行纯化。【结果】 在大肠杆菌原核表达系统中，用IPTG诱导获得了与预测蛋白大小相符的目的蛋白，经SDS-PAGE检测发现目的蛋白以包涵体形式表达，在变性条件下经HisTrap HP亲和层析获得大量可用于抗体制备的纯化蛋白。【结论】利用原核表达系统可获得制备家蚕Orco抗体的抗原蛋白。

【目的】明确意大利蝗Calliptamus italicus (L.)胚胎发育及卵滞育发生的胚胎发育阶段。【方法】2013-2014年间，通过室外胚胎发育进度检测和室内孵化培养观察，研究其胚胎发育等级、滞育和越冬的胚胎阶段及自然越冬滞育的解除。【结果】意大利蝗的胚胎发育可划分为18个阶段；意大利蝗胚胎有反向移转、转旋和顺向移动3种胚胎转动方式；意大利蝗卵滞育发生的胚胎发育阶段为第Ⅻ阶段。自然条件下，意大利蝗卵发育至次年1月21日，仅部分卵解除滞育，解除滞育卵的发育历期最长；随着越冬时间的延长，解除滞育的卵逐渐增多，其发育历期逐渐缩短；直至次年3月29日卵基本完全解除滞育。意大利蝗雌成虫所产的早中期卵（7月27日-8月16日所产卵）以胚胎发育第Ⅻ阶段（滞育发生的胚胎发育阶段）越冬，于翌年4月16日（侯地温平均值：7.59℃，最高温：15.95℃，最低温：2.67℃）继续发育；雌成虫所产的晚期卵（8月28日-9月4日所产卵），自11月4日（侯地温平均值：7.32℃，最高温：9.00℃，最低温：5.18℃）开始以胚胎第Ⅹ阶段越冬，于翌年3月29日（侯地温平均值：3.78℃，最高温：10.27℃，最低温：0.14℃）继续发育。【结论】意大利蝗雌成虫所产的早中期和晚期卵，其越冬胚胎发育阶段、开始越冬时间及越冬后继续发育的时间均不同。

【目的】家蚕Bombyx mori微粒子病是蚕业生产上的毁灭性病害，家蚕微孢子虫Nosema bombycis是该病的病原，可经卵垂直传播和经口水平传播。为了探索家蚕微孢子虫中对重复元件的抵御以及对基因转录调控的潜在方式，本研究拟在基因组水平上对该物种的小RNAs进行全面系统的分析，鉴定与转座子相关的小RNAs和潜在的miRNAs。【方法】从感染家蚕微孢子虫的家蚕中肠中提取总RNA，分离小片段RNA并反转录后，进行Solexa高通量测序。通过生物信息学方法对小RNAs进行分类及功能注释，鉴定起源于家蚕微孢子虫不同类型转座子的小RNAs，并对潜在的miRNA进行预测分析。【结果】家蚕微孢子虫小RNAs的长度主要是24和25 nt，其中大部分序列表现出5′末端的尿嘧啶偏好性。家蚕微孢子虫中存在丰富的与转座子相关联的小RNAs，并且与转座子标准序列匹配的反义小RNAs明显多于正义小RNAs。同时，鉴定获得了31个候选miRNAs，部分为Nosema属的其他孢子虫中所共有，暗示其在微孢子虫基因组进化上具有保守性。【结论】首次鉴定到家蚕微孢子虫的转座子相关性小RNAs，暗示小RNAs在家蚕微孢子虫基因组对转座子防御过程中起到作用，31个潜在的miRNAs为家蚕微孢子虫miRNAs的功能验证提供了后续靶标。

【目的】家蚕Bombyx mori核型多角体病毒（BmNPV）核衣壳蛋白VP39为病毒装配所必需。本研究旨在初探VP39在病毒侵染家蚕细胞过程中的功能及特征，以期为家蚕抗病毒研究提供研究基础。【方法】本研究通过构建原核表达载体，诱导原核表达得到多克隆抗体，以Western blot验证VP39表达时相;构建真核表达载体，转染细胞后以免疫荧光手段观测VP39表达定位及影响病毒增殖现象。【结果】制备了VP39多克隆抗体。VP39在病毒感染后大量定位于家蚕细胞核，部分定位于胞质，而过表达的VP39定位于家蚕细胞胞质；过表达VP39后抑制BmNPV感染家蚕细胞。【结论】在BmN-SWU1细胞中过表达VP39会影响BmNPV的扩散，导致BmNPV感染细胞数目大量减少。该结果为VP39调控宿主与病毒的相互作用提供了新的思路。

【目的】筛选出二斑叶螨Tetranychus urticae Koch抗甲氰菊酯、阿维菌素及螺螨酯混剂的实时定量PCR最优内参基因。【方法】选取5.8S rRNA, α-tubulin, TBP, β-actin, ELFn, RPL13a, GAPDH和SDHA 8个候选内参基因，以GeNorm, BestKeeper和Normfinder 3个软件分析这8个基因在二斑叶螨多重抗性品系中的表达稳定性, 并以筛选的内参基因分析二斑叶螨P450酶系CYP392A亚家族基因的表达水平。【结果】经GeNorm, BestKeeper和Normfinder 3个软件综合评价确定ELFn基因为二斑叶螨敏感品系(susceptible strain, SS)和多重抗性品系(multi-pesticide resistant strain, Mp-R)各发育阶段的最优内参基因。以ELFn为内参基因对二斑叶螨CYP392A亚家族16个基因表达量进行分析，结果表明：经多重抗性选育40代后，Mp-R品系卵期CYP392A1表达量显著上调；CYP392A16基因在各发育阶段表达量极显著高于SS品系相应发育阶段；其他基因表达量在敏感品系和抗性品系之间差异不显著。【结论】筛选出了SS和MpR品系中各发育阶段最佳内参基因为EFLn；Mp-R品系CYP392A亚家族16个基因的表达量在幼螨和若螨阶段低于卵与成螨阶段，其中CYP392A16基因在二斑叶螨多重抗性的形成中起主要作用。该结果为二斑叶螨多重抗性研究奠定了一定基础。

【目的】为了解稻虱红单节螯蜂Haplogonatopus apicalis与白背飞虱Sogatella furcifera间的互作关系，开展了稻虱红单节螯蜂在白背飞虱不同龄期寄生时，对寄主及其自身发育表现影响的研究。【方法】在室内25℃条件下，观察了被寄生的白背飞虱各龄若虫及其寄生蜂稻虱红单节螯蜂的发育表现。【结果】白背飞虱2, 3, 4和5龄若虫被寄生后，当龄及其后各龄的历期均显著延长；2和3龄若虫被寄生后，成虫羽化率仅分别为54.29%和60.95%，显著低于在4和5龄若虫被寄生后的成虫羽化率（分别为96.20%和100%）。稻虱红单节螯蜂寄生白背飞虱5龄若虫后的发育历期（23.77 d）显著短于寄生2龄若虫后的发育历期（27.77 d）；寄生3龄若虫的成蜂羽化率最高，为56.19%；而寄生5龄若虫的羽化雄蜂比例最高，为77.12%。【结论】稻虱红单节螯蜂寄生可使白背飞虱若虫发育历期显著延长，白背飞虱2和3龄若虫是稻虱红单节螯蜂发育的适宜寄主。

【目的】研究实验室条件下韭蛆 Bradysia odoriphaga Yang et Zhang大量饲养的方法以解决试虫不足的问题。【方法】本实验在25℃，相对湿度75%，光周期16L:8D条件下，通过控制变量法筛选出人工饲料配方，运用两性生命表软件，分析比较人工饲料与韭菜Allium tuberosum的饲喂效果。【结果】对不同成分和不同含量的8种韭蛆人工饲料配方筛选，结果确定最优的人工饲料配方成分和含量为：平菇粉6 g，韭菜粉5 g，琼脂粉1.25 g，山梨酸0.04 g，苯甲酸0.05 g，酵母粉0.5 g，维生素C 2.5 g和水50 mL。该配方和韭菜饲养效果相当，不存在显著差异（P>0.05）。同时，两性生命表结果表明，人工饲料饲喂的韭蛆平均世代周期23.6800 d，韭菜饲喂的韭蛆世代周期为25.9000 d，两者之间差异显著（P<0.05）。生殖生物学特性分析发现：韭菜和人工饲料饲喂的韭蛆雌成虫净生殖率分别为16.3200和41.1800/d，内禀增长率分别为0.1078和0.1570/d。【结论】筛选的人工饲料和韭菜均可以稳定地完成韭蛆的世代繁殖，且人工饲料饲喂效果略优于韭菜，另外人工饲料较韭菜不但具有低成本省人工的优点，而且可解决韭菜反季节供应和农药残留问题，保证稳定的虫源供给。

【目的】棕斑澳黄毒蛾Orvasca subnotata Walker是于降香黄檀Dalbergia odorifera T. Chen人工林中新发现的一种食叶害虫，其生物学特性描述和龄期判定是虫害预测预报与林间防治的重要依据。【方法】本研究通过定期林间采样的方法，对棕斑澳黄毒蛾不同发育阶段的形态特征及生活史和生活习性进行调查; 并通过测量头宽、前胸毛瘤宽和体长3项分龄指标，测定棕斑澳黄毒蛾幼虫的龄期。【结果】本文报道了棕斑澳黄毒蛾不同发育阶段的形态特征、生活史和生活习性。研究结果表明，棕斑澳黄毒蛾幼虫随龄期增长，前胸逐渐变黑，腹部背线和翻缩腺颜色逐渐加深，特征逐渐变得明显。通过频次分析统计，测得棕斑澳黄毒蛾幼虫龄数为5龄。头宽和前胸毛瘤宽可作为分龄指标，头宽优于前胸毛瘤宽，且前胸毛瘤宽与头宽呈直线关系（y=0.994x-0.114，R=0.999）。体长经统计检验，符合Dyar氏法则，但区域重叠明显，不宜作为分龄指标。【结论】本研究确定了棕斑澳黄毒蛾的生物学特性及幼虫虫龄，可为林间防治提供参考依据。

【目的】粉毛蚜亚科昆虫是重要的林业害虫，但是由于蚜虫体型较小，形态特征趋于简化，可用于物种鉴定的有效特征非常有限，因此一般基于外部形态特征难以对蚜虫物种实现快速准确的鉴定。本研究获取该亚科2属10种的DNA条形码标准序列，解决部分物种的分类问题，同时比较了3种标记对粉毛蚜亚科（Pterocommatinae）物种快速鉴定的效率。【方法】基于蚜虫的线粒体细胞色素氧化酶C亚基I（cytochrome oxidase subunit I, COI）基因、细胞色素b（cytochrome b, Cytb）基因和蚜虫初级内共生菌Buchnera 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（gluconate-6-phosphate dehydrogenase, gnd）基因，对2属10种共197号样品进行NJ分析、遗传距离的计算以及基于相似性的物种鉴定分析。【结果】与K-2P模型相比，基于p-distance模型计算得到的遗传距离更小，序列差异频次图上种内距离与种间距离的重叠区域也小于前者；COI序列的物种鉴定成功率最高。获取了粉毛蚜亚科近200条DNA条形码标准序列，并建立了基于3个标记的该亚科物种DNA条形码序列库。【结论】在粉毛蚜亚科DNA条形码研究中，p-distance模型要优于K-2P模型；COI序列具有最高的条形码分析效率；增毛卷粉毛蚜Plocamaphis assetacea可能为蜡卷粉毛蚜Plocamaphis flocculosa的同物异名。