昆虫学报 ›› 2016, Vol. 59 ›› Issue (7): 724-731.doi: 10.16380/j.kcxb.2016.07.004
施莉莉1, 耿涛1, 吴萍1, 潘中华2, 覃光星1,高坤1, 侯成香1, 郭锡杰1,*
SHI Li-Li1, GENG Tao1, WU Ping1, PAN Zhong-Hua2, QIN Guang-Xing1, GAO Kun1, HOU Cheng-Xiang1, GUO Xi-Jie1,*
摘要: 【目的】Novel-31*是在家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus, BmCPV) 感染的家蚕中发现的一个差异表达miRNA。本研究旨在验证Novel-31*对其靶基因表达的调控作用,以便进一步研究miRNA及其靶基因在昆虫免疫调节中的作用。【方法】用生物信息学方法预测Novel-31*的靶基因,荧光定量PCR分析Novel-31*及其靶基因在家蚕感染BmCPV后不同时间点的表达变化;构建miRNA慢病毒表达载体和靶基因慢病毒表达载体,转染293T细胞,同时合成Novel-31* mimics转染家蚕培养细胞BmN,使用荧光定量PCR检测 Novel-31*对靶基因表达的调控作用。【结果】生物信息学方法预测发现,溶血素基因是Novel-31*的靶基因,其结合位点位于溶血素基因的5′ UTR 区域。荧光定量PCR分析表明,Novel-31*及溶血素基因在感染BmCPV的家蚕血淋巴细胞中呈现明显的上调表达。荧光定量PCR检测表明,在Novel-31*慢病毒表达载体和溶血素基因5′UTR慢病毒表达载体转染的293T细胞中和在转染Novel-31* mimics的家蚕BmN细胞中,溶血素基因都上调表达。【结论】溶血素基因是miRNA Novel-31*的靶基因,Novel-31*与溶血素基因5′UTR结合,上调溶血素基因的表达。