棉铃虫普通气味结合蛋白Ⅱ基因的表达及鉴定

摘要/Abstract

摘要： 通过PCR扩增的方法获得了棉铃虫普通气味结合蛋白Ⅱ(GOBP2-Harm)基因成熟蛋白阅读框序列，构建了GOBP2-Harm原核表达载体pGEX/GOBP2-Harm，并成功地在大肠杆菌中进行了表达。SDS-PAGE分析表明：大部分GOBP2-Harm重组蛋白形成不溶性的包涵体，超声波破碎大肠杆菌细胞后，在上清液中能检测到少量的可溶性GOBP2-Harm蛋白。为了获得大量纯化的可溶性目的蛋白，我们对包涵体进行了溶解和重折叠，并通过亲合层析法进行了纯化。纯化产物能与多音天蚕(Antheraea polyphemus) GOBP抗血清发生交叉反应，证实表达产物属于昆虫普通气味结合蛋白。

关键词: 棉铃虫, 普通气味结合蛋白Ⅱ, PCR扩增, 原核表达, 重组蛋白, 亲合层析

Abstract: The intact open reading fragment sequence of mature GOBP2-Harm from Helicoverpa armigera was obtained by PCR amplification. The ORF of GOBP2-Harm was subcloned into expression vector pGEX-4T-1. Recombinant protein was expressed successfully in E. coli induced by IPTG. The analysis of SDS-PAGE showed that most of recombinant protein was insoluble inclusion body and only little fraction of recombinant protein of GOBP2-Harm is soluble. In order to obtain abundant soluble recombinant protein, the insoluble inclusion body GOBP2-Harm was solubilized, refolded and purified. The purified product was crossreactive with an anti-GOBP (Antheraea polyphemus) antiserum, which indicated the purified protein belonged to GOBP of insect.

Key words: Helicoverpa armigera, general odorant binding proteinⅡ, PCR amplification, prokaryotic expression, recombinant protein, affinity chromatography

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棉铃虫普通气味结合蛋白Ⅱ基因的表达及鉴定

Expression and identification of general odorant binding proteinⅡfrom Helicoverpa armigera (Hübner)

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