美洲大蠊变应原Cr PI的表达、纯化与免疫学特性鉴定

›› 2005, Vol. 48 ›› Issue (1): 13-17.

美洲大蠊变应原Cr PI的表达、纯化与免疫学特性鉴定

高波¹，刘志刚^1，2*，邢苗^1,2，徐宏²，罗时文²，赖仞²

出版日期:2005-03-20 发布日期:2005-02-20

Expression, purification and characterization of the American cockroach Cr PI allergen

GAO Bo¹，LIU Zhi-Gang^1,2*，XING Miao^1,2，XU Hong²，　LUO Shi-Wen², LAI Ren²

Online:2005-03-20 Published:2005-02-20
Contact: LIU ZhiGang

摘要/Abstract

摘要： 以阳性噬菌体克隆为模板，通过PCR扩增出目的基因片段并克隆入T载体，经测序证实为美洲大蠊Periplaneta americana变应原Cr PI后，将该基因亚克隆入表达载体pGEX-5X-1。美洲大蠊变应原Cr PI在大肠杆菌中得到高效表达，但主要以包涵体形式存在于沉淀中。目的蛋白溶于6 mol/L盐酸胍并经稀释复性后，经Glutathione Sepharose^TM4B亲和层析，纯度达 90%以上。以蟑螂过敏病人血清进行免疫印迹检测，结果显示重组变应原具有良好的IgE结合活性。

关键词: 美洲大蠊, 重组变应原Cr PI, 蛋白表达, 亲和层析, 免疫印迹

Abstract: Using the Cr PI clone from the λEXcell library as a template, the cDNA fragments were first generated by PCR techniques and then ligated into T vector. After being confirmed by DNA sequencing, the cDNA encoding the American cockroach Cr PI allergen was subcloned into pGEX-5X-1 and expressed as GSTfusion protein in the form of inclusion bodies. After being dissolved in 6 mol/L guanidine hydrochloride and renatured with a simple dilution method, the proteins of target were purified to above 90% purity by affinity chromatography with Glutathione Sepharose 4B. Tested with sera from subjects allergic to cockroach, the recombinant allergen was shown to possess good IgEbinding activity as determined by Western blotting.

Key words: American cockroach, Periplaneta americana, recombinant allergen Cr PI, protein expression, affinity chromatography, Western blotting

高波¹，刘志刚^1，2*，邢苗^1,2，徐宏²，罗时文²，赖仞². 美洲大蠊变应原Cr PI的表达、纯化与免疫学特性鉴定[J]. , 2005, 48(1): 13-17.

GAO Bo¹，LIU Zhi-Gang^1,2*，XING Miao^1,2，XU Hong²，　LUO Shi-Wen², LAI Ren². Expression, purification and characterization of the American cockroach Cr PI allergen[J]. , 2005, 48(1): 13-17.

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