粘虫中肠α-淀粉酶活性测定方法的参数优化

›› 2007, Vol. 50 ›› Issue (10): 981-988.

粘虫中肠α-淀粉酶活性测定方法的参数优化

孔玉萍，黄青春，刘曼慧，丰俊，刘扬

出版日期:2007-10-20 发布日期:2007-11-23
通讯作者: 黄青春

Parametric optimization on the sensitive determination of midgut α-amylase in larvae of Mythimna separata Walker

Online:2007-10-20 Published:2007-11-23

摘要/Abstract

摘要： 针对粘虫Mythimna separata中肠α-淀粉酶筛选了11种不同参数组合的3，5－二硝基水杨酸活性测定方法，并对其中最适组合的各个参数进行了优化。结果表明：在离体测定条件下，粘虫中肠α-淀粉酶活性的最优化测定参数为0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 8.0，含有55 mmol/L NaCl）、温度45℃、吸收波长480 nm。Ca²⁺对α-淀粉酶活性具有抑制作用。该优化法能够显著降低粘虫、德国小蠊Blattella germanica、黄粉虫Tenebrio molitor、淡色库蚊Culex pipiens pallens和家蝇Musca domestica等昆虫α-淀粉酶的米氏常数K_m值，且粘虫和德国小蠊α-淀粉酶的V_max值增大，但黄粉虫、淡色库蚊和家蝇α-淀粉酶的V_max值均明显减小。结果说明，在该优化体系下，粘虫α-淀粉酶与底物的亲和力增强，最大反应速度增大，测定酶活性的准确性和灵敏度显著提高；同时该优化体系也可作为测定德国小蠊α-淀粉酶活性的优化方法，但不适合作为黄粉虫、淡色库蚊和家蝇α-淀粉酶的最优化测定方法。

关键词: 粘虫, α-淀粉酶, 参数优化, 动力学常数

Abstract: Parametric optimization on the activity determination of midgut α-amylase in larvae of Mythimna separate Walker was investigated by screening the 3,5 dinitrosalicylic acid methods with eleven combinations of parameters. The results showed that the in vitro determined optimal parameters were 0.03 mol/L phosphate buffer (pH 8.0) containing 55 mmol/L NaCl, reaction temperature 45℃ and absorbance wavelength 480 nm. Ca²⁺inhibited the activity of α-amylase. Moreover, the optimal method significantly decreased Km value of α-amylase from M. separate, Blattella germanica, Tenebrio molitor, Culex pipiens pallens and Musca domestica larvae, and increased V_max value of α-amylase from M. separate and B. germanica, but strongly decreased Vmax values of α-amylase from T. molitor, C. pipiens pallens and M. domestica larvae. The study suggested that the optimal method not only enhanced the affinity and the maximum reaction velocity of α-amylase with its substrate, but also improved the accuracy and the sensitivity on the activity of α-amylase from M. separate larvae in assays, whereas it was not the optimal method for determining the activity of α-amylase from T. molitor, C. pipiens pallens and M. domestica larvae.

Key words: Mythimna separata, α-amylase, parametric optimization, kinetic constant

孔玉萍，黄青春，刘曼慧，丰俊，刘扬. 粘虫中肠α-淀粉酶活性测定方法的参数优化[J]. , 2007, 50(10): 981-988.

[1]	郭培, 马百伟, 赵新成, 王高平, 谢桂英. 羟色胺在粘虫视叶中的分布[J]. , 2018, 61(6): 668-675.
[2]	李梅梅, 李伯辽, 仵均祥, 许向利. 我国粘虫种群的微卫星位点筛选及遗传多样性分析[J]. , 2018, 61(6): 712-720.
[3]	李鸿波, 戴长庚, 张昌容, 何永福, 胡阳. 粘虫过氧化氢酶基因的克隆与表达分析[J]. , 2018, 61(2): 178-187.
[4]	刘琳, 张欧, 马树杰, 马志卿, 张兴. 雷公藤吉碱对粘虫成虫飞行肌结构的影响[J]. , 2017, 60(7): 782-789.
[5]	王娟, 李伯辽, 仵均祥, 许向利. 变温对粘虫生殖及主要能源物质代谢的影响[J]. , 2016, 59(9): 917-924.
[6]	周琳, 李俊领, 刘向阳, 马志卿, 冯俊涛, 张兴. 雷公藤总生物碱对粘虫幼虫神经系统酶活性及神经递质含量的影响[J]. , 2015, 58(8): 856-863.
[7]	何月秋, 池树友, 杜永均. 黄杨绢野螟雌蛾性信息素的鉴定及诱蛾活性[J]. , 2015, 58(10): 1081-1090.
[8]	董钧锋，刘辉，汤清波，刘杨，赵新成，王桂荣. 粘虫下唇须陷窝器及其感器的形态、类型与分布[J]. , 2014, 57(6): 681-687.
[9]	吕敏, 陈素英, 韩礼波, 胡俊云, 徐晖, 吴文君. 天然产物梣酮对粘虫围食膜的影响[J]. , 2014, 57(12): 1389-1394.
[10]	薛皇娃, 吴伟坚. 瓜实蝇对虚拟波长下不同颜色的趋性（英文）[J]. , 2013, 56(2): 161-166.
[11]	张云慧，张智，李超，姜玉英，曾娟，程登发. 东北地区粘虫的季节性迁飞行为(英文)[J]. , 2013, 56(12): 1418-1429.
[12]	陈翠翠, 高履桐, 师宝君, 温万东, 胡兆农, 吴文君. 杠柳新苷P和E对东方粘虫和小地老虎幼虫中肠蛋白酶活性的影响[J]. , 2012, 55(4): 412-419.
[13]	解娜, 江幸福, 罗礼智, 张蕾. Cry1Ac杀虫蛋白对粘虫中肠几种酶活性的影响[J]. , 2012, 55(2): 168-175.
[14]	王玲, 江幸福, 罗礼智, 胡毅, 张蕾. 粘虫类钙粘蛋白基因的克隆、序列分析及时空表达[J]. , 2011, 54(10): 1094-1103.
[15]	李文香, 王士军, 路子云, 郭会婧, 李建成, 刘小侠, 张青文. 中红侧沟茧蜂寄生对寄主粘虫血淋巴糖类、脂类和蛋白质含量的影响[J]. , 2011, 54(1): 34-40.