粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白锌离子结合域定点突变

›› 2007, Vol. 50 ›› Issue (11): 1111-1115.

粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白锌离子结合域定点突变

尹隽，单梁，宋大新，钟江

出版日期:2008-01-30 发布日期:2008-01-04
通讯作者: 钟江

Site directed mutagenesis of the zinc- binding domain of Trichoplusia ni granulovirus enhancin

Online:2008-01-30 Published:2008-01-04

摘要/Abstract

摘要： 粉纹夜蛾颗粒体病毒（Trichoplusia ni granulovirus, TnGV）增强蛋白（enhancin）具有增强病毒感染力的作用。该蛋白包含一个多种杆状病毒增强蛋白都具有的保守结构域HELGH，是典型的金属蛋白酶锌离子结合域，但该结构域对增强蛋白生物活性的重要性尚未得到研究。本研究通过定点突变构建了该结构域的5个氨基酸分别突变为2种不同氨基酸的共10种增强蛋白突变体基因，并用杆状病毒载体进行了重组表达。活性测定发现，10种突变型增强蛋白大部分都丧失了野生型增强蛋白所具有的降解粉纹夜蛾幼虫围食膜粘蛋白的生物学功能，只有1种（第4位G突变为A）保留该生物学活性。这一结果表明锌离子结合域对增强蛋白生物活性具有重要作用，也提示增强蛋白确是一种金属蛋白酶。

关键词: 杆状病毒, 增强蛋白, 金属蛋白酶, 围食膜, 定点突变

Abstract: Trichoplusia ni granulovirus (TnGV) enhancin can enhance the infectivity of virus in several insect hosts. It has a conserved zinc-binding domain commonly found in metalloproteases, HELGH, which is also present in enhancin proteins from other baculoviruses. In the current work, each of the five amino acids in the domain was mutated to be two different amino acids, and the total 10 mutant enhancin genes were used to construct recombinant AcMNPV. The expression of enhancin proteins was observed in virus-infected cells. Peritrophic membrane (PM) assay indicated all but one mutant lost the ability to degrade the insect intestinal mucin in PM. The only exception was the mutant in which glycine in position 4 was mutated to alanine. The results showed that the zinc-binding domain in enhancin was essential for the activity of the protein, and also suggest that baculovirus enhancin is a metalloprotease.

Key words: Baculovirus, enhancin, metalloprotease, peritrophic membrane, site-directed mutagenesis

尹隽，单梁，宋大新，钟江. 粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白锌离子结合域定点突变[J]. , 2007, 50(11): 1111-1115.

[1]	丁伟峰, 冯颖, 张欣, 李娴, 王成业, 谢世聪. 四个达摩凤蝶新孵幼虫细胞系的建立及其生物学特性[J]. , 2015, 58(8): 826-835.
[2]	何强, 刘绍伦, 马振刚, 张有义, Charles R. VOSSBRINCK, 许金山, 周泽扬. 柞蚕核型多角体病毒（AnpeNPV）三地理株的全基因组比较分析揭示其遗传多样性（英文）[J]. , 2015, 58(5): 535-545.
[3]	谷琳珠，张传溪. 苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒fp25k基因的改造及用于稳定转化Sf9昆虫细胞系[J]. , 2014, 57(3): 308-314.
[4]	吕敏, 陈素英, 韩礼波, 胡俊云, 徐晖, 吴文君. 天然产物梣酮对粘虫围食膜的影响[J]. , 2014, 57(12): 1389-1394.
[5]	孟庆峰，刘晓勇. 杆状病毒与昆虫宿主相互作用的研究进展[J]. , 2013, 56(8): 925-933.
[6]	舒婷, 张剑韵, 黄龙全. 家蚕吡哆醛激酶基因定点突变及突变体功能[J]. , 2011, 54(9): 969-974.
[7]	宋磊, 陈劲春. 金特异性结合短肽介导的重组杆状病毒与胶体金构成的纳米复合体[J]. , 2011, 54(6): 675-679.
[8]	刘小民，李杰，郭巍，徐大庆，张霞. 棉铃虫围食膜肠粘蛋白基因HM72的克隆、表达及其蛋白组织定位[J]. , 2011, 54(2): 127-135.
[9]	童宁, 张剑韵, 黄龙全. 家蚕磷酸吡哆醇氧化酶的体外定点突变及其活性鉴定[J]. , 2011, 54(11): 1231-1235.
[10]	李雯，郭巍，张霞，李杰，孙伟明. 甜菜夜蛾围食膜肠粘蛋白基因SeM-8的克隆、序列分析及在不同组织中的表达检测[J]. , 2010, 53(7): 727-733.
[11]	相兴伟，吴小锋. 昆虫包涵体衍生病毒囊膜蛋白的分子生物学[J]. , 2010, 53(7): 809-817.
[12]	郑桂玲, 李长友, 周洪旭, 李淑文, 李国勋, 薛明. 两株棉铃虫胚胎新细胞系的建立及其对杆状病毒侵染的反应[J]. , 2010, 53(2): 167-174.
[13]	谢秋玲，刘兰，刘秀贵，张玲，徐丽慧，洪岸. 重组人可溶性PDGFRβ/Fc在昆虫细胞Sf9中的表达[J]. , 2009, 52(7): 743-748.
[14]	尹姣，郭巍，李克斌，曹雅忠. 光增白剂M2R对草地螟中肠围食膜的影响及对Bt毒力的增效作用[J]. , 2009, 52(7): 763-768.
[15]	管京敏, 李兵, 王东, 刘衬丽, 沈卫德. 家蚕基质金属蛋白酶基因Bm-MMP的克隆、序列分析及表达研究[J]. , 2009, 52(4): 353-362.