准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白活性的比较研究

摘要/Abstract

摘要： 为了比较准噶尔小胸鳖甲Microdera punctipennis dzhungarica原核表达的不同融合抗冻蛋白活性是否存在差异，分别利用重组表达质粒pGEX-4T-1-Mpafp5和pMAL-p2x-Mpafp5在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达融合抗冻蛋白GST-MpAFP5和MBP-MpAFP5，并利用亲和层析纯化蛋白。SDS-PAGE分析结果证明获得了两种高效表达纯化的GST-MpAFP5和MBP-MpAFP5融合蛋白。在浓度为0.5 mg/mL时，两种蛋白的热滞值分别为0.51℃和1.336℃，其溶液冰晶形态均为棱型。抗冻保护实验结果显示：准噶尔小胸鳖甲两种融合抗冻蛋白均能够显著提高细菌在低温下的存活率，并且MBP-MpAFP5对细菌的保护效果显著高于GST-MpAFP5。研究结果对于准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白的应用具有重要的理论意义。

关键词: 准噶尔小胸鳖甲, 抗冻蛋白, 原核表达, 热滞活性, 冰晶形态

Abstract: In order to compare the activity differences between the prokaryotic expressed MBP-MpAFP5 and GST-MpAFP5, the two recombinant prokaryotic expression plasmids pGEX-4T-1-Mpafp5 and pMAL-p2x-Mpafp5 were expressed in Escherichia coli BL21(DE3) to obtain two different fusion antifreeze proteins of Microdera punctipennis dzhungarica. The two fusion proteins were purified by affinity chromatograph. SDS-PAGE analysis indicated that both of the fusion antifreeze proteins were highly expressed in soluble fractions. The thermal hysteresis activities （THA） of GST-MpAFP5 and MBP-MpAFP5 at a concentration of 0.5 mg/mL were measured as 0.51℃ and 1.336℃, respectively. The ice crystal morphology of both proteins displayed pyramid shape. Cryoprotection to bacteria experiments showed that the two fusion proteins could protect bacteria survival at subzero 7℃ temperature. Comparatively, MBP-MpAFP5 had higher protective activities than GST-MpAFP5. These results provide basic data for application of the insect antifreeze proteins in the future.

Key words: Microdera punctipennis dzhungarica, antifreeze protein, prokaryotic expresion, thermal hysteresis activity, ice crystal morphology

李素丽，张富春，孙琳杰，刘璇，马纪. 准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白活性的比较研究[J]. , 2008, 51(7): 694-699.

LI Su-Li. Comparison of activities of fusion antifreeze proteins from Microdera punctipennis dzhungarica (Coleoptera: Tenebrionidae)[J]. , 2008, 51(7): 694-699.

[1]	张梦宇, 戚翠翠, 胡佳, 徐志峰 . 朱砂叶螨硒代谢通路基因筛选及硒磷酸合成酶 TcSPS1的原核表达和特性分析[J]. 昆虫学报, 2021, 64(5): 566-573.
[2]	陈秋应, 杨喜, 游东蕊, 杨沐, 徐志峰, 肖伟. 桃蛀螟性信息素结合蛋白CpunPBP3的表达模式及性信息素结合特性(英文)[J]. 昆虫学报, 2021, 64(3): 318-326.
[3]	郭洪刚, 魏春花, 张民照, 覃晓春, 杜艳丽. 桃蛀螟气味结合蛋白CpunOBP3和CpunOBP4的基因克隆、原核表达及配体结合特性分析[J]. 昆虫学报, 2021, 64(3): 327-336.
[4]	李琼艳, 陈安利, 荀利杰, 刘增虎, 廖鹏飞, 杨伟克, 董占鹏. 琥珀蚕丝腺转录因子基因AaSGF-1的克隆、原核表达及组织表达分析[J]. 昆虫学报, 2021, 64(1): 41-50.
[5]	张嘉俊, 何兴菲, 张婷婷, 司风玲, 陈斌, 何正波. 中华按蚊气味结合蛋白AsinOBP2的基因克隆、表达谱及与人体气味物质的结合特性分析[J]. 昆虫学报, 2021, 64( 2): 158-169.
[6]	宋月芹, 宋智煜, 董钧锋, 陈庆霄, 孙会忠. 双委夜蛾气味结合蛋白AdisOBP6的原核表达抗体制备及表达谱分析[J]. 昆虫学报, 2021, 64( 2): 149-157.
[7]	李丽芳, 吴朝妍, 韩开健, 吴国星, 朱家颖. 管氏肿腿蜂毒液丝氨酸蛋白酶同源物SgSPH对寄主血淋巴酚氧化酶活性的影响[J]. 昆虫学报, 2021, 64( 2): 170-177.
[8]	杨付来, 赵真真, 王月华, 张兰, 张燕宁, 毛连纲, 蒋红云. 甜菜夜蛾谷氧还蛋白SeGrx原核表达、纯化及酶学性质分析[J]. 昆虫学报, 2020, 63(8): 952-960.
[9]	孙亚兰, 吕琪卉, 杨海博, 胡镇杰, 李定旭, 董钧锋. 疆夜蛾Plus-C气味结合蛋白PsauOBP7的组织表达谱及配体结合特性分析[J]. 昆虫学报, 2020, 63(7): 807-816.
[10]	田彩红, 刘晓光, 黄建荣, 王瑛, 封洪强. 二点委夜蛾非典型嗅觉受体AlepOrco的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备[J]. 昆虫学报, 2020, 63(6): 667-678.
[11]	张轶岭, 李俊昊, 宁嘉兴, Bismark KYEI, 沈中元. 家蚕微孢子虫海藻糖酶3的表达、定位及功能[J]. 昆虫学报, 2020, 63(6): 727-734.
[12]	姜雪冰, 张雪, 杜文梅, 邹振, 张俊杰. 松毛虫赤眼蜂一氧化氮合酶基因的克隆、原核表达及在不同滞育阶段的表达谱分析[J]. 昆虫学报, 2020, 63(6): 679-687.
[13]	陈昊, 罗巧玉, 马秋雨, 初旭, 袁超, 刘颖, 余伟, 吴松青, 王荣, 梁光红, 张飞萍, 胡霞. 松墨天牛漆酶基因MaLac1的克隆、原核表达及表达谱分析[J]. 昆虫学报, 2020, 63(4): 381-389.
[14]	巩雪芳, 杨平, 王延来, 郭莉, 陈迪, 谢寿安, 吕淑杰. 花椒窄吉丁气味结合蛋白基因AzanOBP3的克隆、原核表达及组织表达谱分析[J]. 昆虫学报, 2020, 63(4): 390-400.
[15]	彭露, 秦玉冬, 邹明民, 董诗杰, 刘莉莉, 尤民生. 小菜蛾保幼激素受体PxMet-1和PxMet-2的原核表达、纯化及与保幼激素的结合模式[J]. 昆虫学报, 2020, 63(11): 1295-1304.

准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白活性的比较研究

Comparison of activities of fusion antifreeze proteins from Microdera punctipennis dzhungarica (Coleoptera: Tenebrionidae)

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