基于TaqMan探针的蜜蜂囊状幼虫病病毒荧光PCR检测方法的建立和应用

›› 2010, Vol. 53 ›› Issue (8): 920-925.

基于TaqMan探针的蜜蜂囊状幼虫病病毒荧光PCR检测方法的建立和应用

宋战昀,王振国,冯新,刘金华,魏春艳,蔡阳,孟庆峰,周亮

出版日期:2011-01-29 发布日期:2010-08-20
通讯作者: 王振国

A real-time TaqMan PCR assay to detect sacbrood virus in honeybee and honeybee products

SONG Zhan Yun, WANG Zhen Guo, FENG Xin, LIU Jin Hua, WEI Chun Yan, CAI Yang, MENG Qing Feng, ZHOU Liang

Online:2011-01-29 Published:2010-08-20

摘要/Abstract

摘要：

为建立快速有效的蜜蜂囊状幼虫病检疫方法, 依据TaqMan荧光标记探针技术原理, 针对蜜蜂囊状幼虫病病毒保守序列, 设计出一对特异性引物和一条探针, 建立了一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病病毒的荧光PCR方法。该方法对蜜蜂囊状幼虫病的检测具有较好的特异性, 与蜜蜂急性麻痹病病毒、蜜蜂慢性麻痹病病毒、蜜蜂残翼病病毒和黑蜂王台病病毒之间均无交叉反应。检测灵敏度可达1.0×10²拷贝/μL阳性质粒, 可对低病毒含量的样品进行准确检测。重复性和稳定性试验结果显示, 变异系数为1.6%, 说明该方法具有较好的重复性和稳定性。应用该方法对蜜蜂及蜂制品进行检测, 结果显示所建立的荧光PCR检测方法4 h内即可报告检测结果, 该方法具有快速、灵敏、特异及重复性好等优点, 适用于蜜蜂及其制品中蜜蜂囊状幼虫病病毒的快速检疫。

关键词: 蜜蜂, 囊状幼虫病病毒, TaqMan探针, 荧光PCR检测, 检疫

Abstract:

To establish a rapid and effective quarantine method of the honeybee sacbrood virus disease, we developed a real-time RT-PCR assay for detection of bee sacbrood disease using TaqMan probes. A pair of specific primers and a probe used in this assay were designed based on a highly conserved region in sacbrood bee virus. The assay was shown to be sensitive, detecting less than 1.0×10² copies/μL, and specific for the detection of sacbrood bee virus. Cross-reaction with acute bee paralysis virus, deformed wing virus and black queen cell virus was not observed. The coefficient of variation in the stability experiments was 1.6%. A reliable diagnostic result can be obtained just within 4 h. The assay proved to be a rapid, sensitive, specific and repetitive method for rapid detection of sacbrood bee virus from honeybee and honeybee products in quarantine.

Key words: Honeybee, sacbrood virus (SBV), TaqMan probe, real-time PCR, quarantine

宋战昀,王振国,冯新,刘金华,魏春艳,蔡阳,孟庆峰,周亮. 基于TaqMan探针的蜜蜂囊状幼虫病病毒荧光PCR检测方法的建立和应用[J]. , 2010, 53(8): 920-925.

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