›› 2012, Vol. 55 ›› Issue (4): 403-411.doi:
常润磊, 刘莉, 韦春梅, 郎国俊, 许雯, 毛珊珊, 林同
CHANG Run-Lei, LIU Li, WEI Chun-Mei, LANG Guo-Jun, XU Wen, MAO Shan-Shan, LIN Tong
摘要: 【目的】同安钮夜蛾Ophiusa disjungens(鳞翅目, 夜蛾科)是危害桉树的主要害虫之一。同安钮夜蛾核型多角体病毒(OpdiNPV)是从O. disjungens中分离到的新病毒。本研究主要目的是从分子水平上了解该病毒。【方法】对一条PstⅠ的酶切片段进行了克隆、 测序和分析。【结果】在基因数据库中通过对碱基序列的比对, 发现了一个Ac108的同源基因, 命名为Opdi108 (GenBank登录号为EU 732666)。该基因的开放阅读框含有225对碱基, 其编码蛋白与其他已知杆状病毒同源物有16%~37%的氨基酸序列一致性。在起始密码子ATG上游有一个晚期启动子TAAG。C末端含有His-tag的Opdi108基因在大肠杆菌中Escherichia coli进行了表达, 融合蛋白的分子量为28.7 kDa。以荧光蛋白EGFP为标记物, 构建了Opdi108与EGFP的重组体, 利用Bac-to-Bac表达系统实现了与AcMNPV的重组, 用该重组病毒vEGFP-Opdi108感染斜纹夜蛾Trichoplusia ni 细胞。感染24和72 h后分别用共聚荧光显微镜观察, 发现Opdi108定位在细胞质内。【结论】本研究从分子生物学角度研-OpdiNPV, 为进一步利用该病毒防治包括同安钮夜蛾在内的害虫, 以及构建重组杀虫剂等奠定基础。