二斑叶螨不同抗性品系最佳内参基因的筛选及CYP392E亚家族基因的表达分析

›› 2013, Vol. 56 ›› Issue (10): 1152-1159.doi:

二斑叶螨不同抗性品系最佳内参基因的筛选及CYP392E亚家族基因的表达分析

杨顺义1, 岳秀利1, 王进军2, 沈慧敏1,*

（1. 甘肃农业大学草业学院，草业生态系统省部共建教育部重点实验室，中美草地畜牧业可持续发展中心，兰州 730070;
2. 西南大学植物保护学院，昆虫学及害虫控制工程重点实验室，重庆400716）

出版日期:2013-10-20 发布日期:2013-10-20

Screening of suitable reference genes and expression profiling of CYP392E subfamily genes in different resistant strains of Tetranychus urticae (Acari: Tetranychidae)

YANG Shun-Yi¹, YUE Xiu-Li¹, WANG Jin-Jun², SHEN Hui-Min^1,*

(1. The SinoU.S. Centers for Grazingland Ecosystem Sustainability, Key Laboratory of Grassland Ecosystem Education Ministry, College of Prataculture, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China; 2. China Key Laboratory of Entomology and Pest Control Engineering, College of Plant Protection, Southwest University, Chongqing 400716, China)

Online:2013-10-20 Published:2013-10-20

摘要/Abstract

摘要： 【目的】筛选二斑叶螨Tetranychus urticae敏感品系（SS）、抗阿维菌素品系(Av-R)和抗螺虫乙酯品系（Sp-R）中合适的内参基因，研究二斑叶螨不同抗性品系CYP392E亚家族基因表达水平的变化。【方法】采用实时荧光定量PCR （quantitative realtime PCR, qRT-PCR）技术，对二斑叶螨α-tubulin， β-actin， ELFn， GAPDH， 5.8S rRNA基因和SDHA共6个看家基因的表达稳定性进行分析以期筛选出合适的内参基因，并在此基础上进一步分析二斑叶螨不同品系P450酶系CYP392E亚家族基因的表达量差异。【结果】在二斑叶螨SS， Av-R和Sp-R品系中稳定性最高的内参基因为ELFn。以ELFn为内参基因， CYP392E7基因相对表达量在二斑叶螨Av-R品系中显著高于SS品系(P<0.05)，为后者的2.18倍，而在Sp-R品系和SS品系中差异不显著；其余基因的相对表达量在2个抗性品系中均没有增加， Av-R品系的CYP392E4， CYP392E9和CYP392E10基因以及Sp-R品系的CYP392E1和CYP392E9基因相对表达量甚至显著下调，分别为SS品系的48%， 74%， 65%， 63%和73%。【结论】在二斑叶螨SS， Av-R和Sp-R品系中ELFn为理想的内参基因， Av-R品系CYP392E4， CYP392E7， CYP392E9和CYP392E10基因相对表达量的显著变化可能与二斑叶螨对阿维菌素的抗性形成有关， Sp-R品系CYP392E1和CYP392E9基因也可能与二斑叶螨对螺虫乙酯的抗性形成有一定联系。

关键词: 二斑叶螨, 阿维菌素, 螺虫乙酯, 抗性品系, 敏感品系, P450酶系, CYP392E亚家族, qRT-PCR, 内参基因, 表达量

Abstract: 【Aim】 To screen suitable reference genes for studying the expression levels of CYP392E subfamily genes in susceptible (SS), avermectin-resistant (Av-R) and spirotetramat-resistant (Sp-R) strains of Tetranychus urticae. 【Methods】 The mRNA expression stability of six house keeping genes, i. e., α-tubulin, β-actin, ELFn, GAPDH, 5.8S rRNA gene and SDHA of T. urticae was detected by quantitative real-time PCR (qRT-PCR), and the relative expression level of CYP392E subfamily reference genes of cytochrome P450 monooxygenases (P450s) was analyzed. 【Results】 ELFn was the most stable reference gene in SS, Av-R and Sp-R strains of T. urticae. When ELFn was used as the reference gene, the expression level of CYP392E7 in Av-R strain (2.18-fold as high as that in SS strain) was significantly higher than that in SS strain, while there was no significant difference between Sp-R strain and SS strain. However, the relative expression levels of other genes did not increase, and even those of CYP392E4, CYP392E9 and CYP392E10 in Av-R strain and CYP392E1 and CYP392E9 in Sp-R strain decreased significantly (P<0.05) (48%, 74%, 65%, 63% and 73% of the expression level in SS strain, respectively). 【Conclusion】 ELFn could be used as an ideal reference in SS, Av-R and Sp-R strains of T. urticae. The significant change of the expression levels of CYP392E4, CYP392E7, CYP392E9 and CYP392E10 in Av-R strain may be related with the resistance of T. urticae to avermectin; CYP392E1 and CYP392E9 in Sp-R strain may also be related with the resistance of T. urticae to spirotetramat.

Key words: Tetranychus urticae, avermectin, spirotetramat, resistant strain, susceptible strain, cytochrome P450 monooxygenases (P450s), CYP392E subfamily, qRT-PCR, reference gene, expression level

杨顺义, 岳秀利, 王进军, 沈慧敏. 二斑叶螨不同抗性品系最佳内参基因的筛选及CYP392E亚家族基因的表达分析[J]. , 2013, 56(10): 1152-1159.

YANG Shun-Yi, YUE Xiu-Li, WANG Jin-Jun, SHEN Hui-Min. Screening of suitable reference genes and expression profiling of CYP392E subfamily genes in different resistant strains of Tetranychus urticae (Acari: Tetranychidae)[J]. , 2013, 56(10): 1152-1159.

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[1]	李慧, 何玄玉, 陶蓉, 陈宏建, 龚馨玥, 李寿银, 郝德君. 松墨天牛小热激蛋白基因的克隆、表达谱及对温度胁迫的响应[J]. , 2018, 61(7): 749-760.
[2]	岳文波, 郅军锐, 刘利, 叶茂, 张向前, 曾广 . 害虫取食和机械损伤对菜豆不同部位叶片防御酶活性的影响[J]. , 2018, 61(7): 860-870.
[3]	杨苓, 胡晓静, 徐志峰, 何林, 肖伟. 桃蛀螟实时荧光定量PCR内参基因的筛选[J]. , 2017, 60(11): 1266-1277.
[4]	郅军锐, 田甜, 温娟, 刘勇. 西花蓟马或二斑叶螨为害的菜豆对两者间后取食者体内保护酶和解毒酶活性的影响[J]. , 2016, 59(7): 707-715.
[5]	程小娟, 蔡立君, 郑丽双, 覃江梅, 黄宇萍, 尤民生. 小菜蛾气味结合蛋白OBP2基因的克隆、表达谱及其结合特性分析[J]. , 2016, 59(4): 365-376.
[6]	冯波, 郭前爽, 毛必鹏, 杜永均. 松墨天牛化学感受组织荧光定量PCR内参基因的鉴定与筛选[J]. , 2016, 59(4): 427-437.
[7]	金桂华, 宫亚军, 潜宗伟, 朱亮, 王泽华, 陈金翠, 魏书军. 二斑叶螨对不同品种茄子的选择性与适合度[J]. , 2016, 59(3): 328-336.
[8]	刘贻聪, 王玲, 张友军, 谢文, 吴青君, 王少丽. 二斑叶螨田间种群对阿维菌素的抗性及抗性相关基因表达分析[J]. , 2016, 59(11): 1199-1205.
[9]	杨雪, 唐婷, 王一丽, 刘欣, 曹新茹, 倪志华, 柳峰松. 家蝇新型抗菌肽Muscin的基因克隆、表达模式及抑菌活性[J]. , 2015, 58(6): 617-624.
[10]	周兴隆, 杨顺义, 郝雨, 王进军, 张新虎, 沈慧敏. 二斑叶螨多重抗性品系最优内参基因的筛选及CYP392A亚家族基因的表达分析[J]. , 2015, 58(11): 1229-1236.
[11]	封冰，梁沛，高希武. 小菜蛾U6 snRNA基因的克隆及作为miRNA定量表达分析内参基因的评价[J]. , 2014, 57(3): 286-292.
[12]	宋丽雯，沈一凡，岳秀利，郭金梅，沈慧敏. 截形叶螨抗哒螨灵品系和敏感品系体内解毒酶活性的变化[J]. , 2014, 57(3): 323-329.
[13]	王佳, 赵静, 刘映红. 柑橘大实蝇内参基因的评估[J]. , 2014, 57(12): 1375-1380.
[14]	陈芳, 陆永跃. 温度胁迫下棉花粉蚧热激蛋白基因的表达分析[J]. , 2014, 57(11): 1253-1264.
[15]	陈芳, 陆永跃. 热胁迫下棉花粉蚧内参基因的筛选[J]. , 2014, 57(10): 1146-1154.