家蚕素Ⅱ基因原核表达及蛋白纯化

›› 2014, Vol. 57 ›› Issue (1): 8-12.

家蚕素Ⅱ基因原核表达及蛋白纯化

徐欣¹, 刘朝阳¹, 崔海波¹, 杨洋¹, 郭晓琪¹, 张涛², 刘庆信¹, 崔为正^1,*

（1. 山东农业大学林学院，山东泰安 271018； 2. 泰安泰山成通制丝有限公司，山东泰安 271000）

出版日期:2014-01-20 发布日期:2014-01-20

Prokaryotic expression and purification of bombyxin-Ⅱ in the silkworm (Bombyx mori)

XU Xin1, LIU ZhaoYang1, CUI HaiBo1, YANG Yang1, GUO XiaoQi1, ZHANG Tao2, LIU QingXin1, CUI WeiZheng1,*

(1. Institue of Forestry, Shandong Agricultural University, Tai’an, Shandong 271018, China; 2. Taishan Cheng Tong Filature Corporation Limited of Tai’an, Shandong 271000, China)

Online:2014-01-20 Published:2014-01-20

摘要/Abstract

摘要： 【目的】建立一种简便、快速且能大量获得家蚕素Ⅱ （bombyxin-Ⅱ, BBXⅡ）的有效方法。【方法】运用RTPCR技术得到bombyxin-Ⅱ基因全长cDNA序列，采用原核表达技术对该基因进行异源表达，并利用亲和层析的方法得到纯化的BBXⅡ蛋白。【结果】从家蚕Bombyx mori头部mRNA中经过反转录获得bombyxin-Ⅱ基因的cDNA，并构建了原核表达载体pET28a-BBXⅡ，经过异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，使BBXⅡ获得了大量表达，进一步用HisTrap HP亲和层析，成功得到大量纯化的BBXⅡ。【结论】本实验建立的原核表达方法和蛋白纯化技术，是大量制备BBXⅡ的一种简易而有效的方法，为进一步开展BBX的分泌机制和作用机理研究，以及利用原核表达系统研发BBX降血糖药物奠定了基础。

关键词: 家蚕, 类胰岛素肽, 家蚕素, 基因克隆, 原核表达, 蛋白纯化

Abstract: 【Aim】 To establish a simple, quick and effective method to get a large number of bombyxin-Ⅱ (BBXⅡ). 【Methods】 Full-length cDNA of the bombyxin-Ⅱ gene from the silkworm (Bombyx mori) was obtained through RT-PCR technique, and its promoter sequences were cloned based on genome sequences of the silkworm. Meanwhile we got purified BBXⅡ protein by affinity chromatography. 【Results】 We obtained the cDNA of bombyxin-Ⅱ by reverse transcription of the mRNA from the head of the silkworm and built the prokaryotic expression vector pET28a-BBXⅡ. The BBXⅡwas highly expressed by IPTG induction. Then we successfully got a large amount of purified BBXⅡ by HisTrap HP affinity chromatography. 【Conclusion】 The prokaryotic expression and protein purification technology that we built is a simple and effective method to obtain a lot of preparation of BBXⅡ. The results lay a foundation for further research of the secretion and action mechanisms of BBX and for discovery of BBX hypoglycemic drugs by using prokaryotic expression system.

Key words: Bombyx mori, insulin like peptide, bombyxin (BBX), gene cloning, prokaryotic expression, protein purification

徐欣, 刘朝阳, 崔海波, 杨洋, 郭晓琪, 张涛, 刘庆信, 崔为正 . 家蚕素Ⅱ基因原核表达及蛋白纯化[J]. , 2014, 57(1): 8-12.

XU Xin, LIU Zhao-Yang, CUI Hai-Bo, YANG Yang, GUO Xiao-Qi, ZHANG Tao, LIU Qing-Xin, CUI Wei-Zheng. Prokaryotic expression and purification of bombyxin-Ⅱ in the silkworm (Bombyx mori)[J]. , 2014, 57(1): 8-12.

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