›› 2018, Vol. 61 ›› Issue (7): 795-800.doi: 10.16380/j.kcxb.2018.07.005
李新梅, 邱妩洁, 崔斌, 杨宗霖, 申雅文, 路一平, 阚云超, 李丹丹*
LI Xin-Mei, QIU Wu-Jie, CUI Bin, YANG Zong-Lin, SHEN Ya-Wen, LU Yi-Ping, KAN Yun-Chao, LI Dan-Dan*
摘要： 【目的】利用反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide, ASO)干涉昆虫核仁小RNA(small nucleolar RNA, snoRNA)Bm-15的表达，并探索ASO进入细胞后的代谢途径。【方法】利用脂质体携带Cy5标记的、2′-O核糖甲基化修饰和硫代磷酸骨架修饰的Bm-15 ASO转染草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda Sf9细胞，然后通过Cy5标记与溶酶体及线粒体免疫荧光探针共定位研究Bm-15 ASO在细胞内的转运机制。利用实时荧光定量PCR检测转染Bm-15 ASO的Sf9细胞中Bm-15的表达量，分析ASO对snoRNA Bm-15的干涉效果。【结果】Bm-15 ASO转染草地贪夜蛾Sf9细胞48 h后，ASO荧光信号充斥整个细胞和位于细胞边缘的比例分别为34%和66%，说明ASO进入细胞后可能分布在不同的亚细胞器中；进一步对Bm-15 ASO和溶酶体及线粒体进行共定位发现，位于细胞边缘的ASO大多被运输至溶酶体而不会存在于线粒体等细胞器中。实时荧光定量PCR检测结果表明，转染Bm-15 ASO的Sf9细胞中Bm-15表达量下降了47%。【结论】即使经过多种化学修饰，ASO仍然逃避不了细胞内源降解机器的识别，这有效解释了某些情况下利用ASO干涉基因表达时靶标基因干涉效率较低的现象。
