棉铃虫幼虫神经细胞的急性分离培养及其电压门控通道的膜片钳研究

›› 2001, Vol. 44 ›› Issue (4): 422-427.

棉铃虫幼虫神经细胞的急性分离培养及其电压门控通道的膜片钳研究

贺秉军¹，刘安西¹，陈家童²，孙金生¹，芮昌辉³，孟香清³

出版日期:2001-11-20 发布日期:2001-11-20

Acute isolation and culture of nerve cell from the cotton bollworm and the patch\|clamp study on the voltage-gated ion channels in the cultured neurons

HE Bing-jun¹, LIU An-xi¹, CHEN Jia-tong², SUN Jin-sheng¹, RUI Chang-hui³, MENG Xiang-qing³

Online:2001-11-20 Published:2001-11-20

摘要/Abstract

摘要： 探索了棉铃虫Helicoverpa armigera幼虫神经细胞的急性分离与体外培养的条件，并利用全细胞膜片钳技术首次对棉铃虫幼虫急性分离神经细胞的电压门控性钠、钾和钙通道的基本电生理学特性进行了研究。结果表明，棉铃虫幼虫中枢神经细胞在TC-100、L-15和Grace培养基中均可贴壁生长，在DMEM培养基中基本不能存活。在TC-100培养基分别与其它三种培养基按一定比例混合形成的培养液中，TC-100与L-15等量混合培养液更适合于神经细胞的生长。全细胞电压钳条件下，可分别记录到电压门控性钠、钾和钙通道电流。钙电流特征为高电压激活、缓慢失活；钠电流对河豚毒素敏感；钾电流可被细胞外液中的氯化四乙胺和4-氨基吡啶抑制。

关键词: 棉铃虫, 神经细胞, 离子通道, 细胞培养

Abstract: The dissociation and culture of cells isolated from the ventral nerve cord of the larva of the cotton bollworm, Helicoverpa armigera are described. The propterties of the voltage-gated ion channels of the cultured neurons were studied with patchclamp technique in the wholecell configuration. Neurons survived and grew fast in either TC-100, Leibovitz's L-15 or Grace medium supplemented with glutathione, glutamine, glucose and 10% foetal calf serum. The medium made up of equal parts of TC-100 and Leibovitz's L-15 enabled better adherence, survival and growth. Most neurons showed neurite growth exhibiting unipolar, bipolar or multipolar. Neural cell bodies readily formed seals with patch pipettes, allowing stable, whole-cell patch-clamp recordings. Depolarization of the cell under voltage-clamp resulted in TTX-sensitive sodium currents, high-voltage activated calcium currents and two types of outward potassium currents. The potassium currents could be decreased by TEA-Cl and 4-AP.

Key words: Helicoverpa armigera, nerve cell, ion channel, cell culture

贺秉军¹，刘安西¹，陈家童²，孙金生¹，芮昌辉³，孟香清³. 棉铃虫幼虫神经细胞的急性分离培养及其电压门控通道的膜片钳研究[J]. , 2001, 44(4): 422-427.

HE Bing-jun¹, LIU An-xi¹, CHEN Jia-tong², SUN Jin-sheng¹, RUI Chang-hui³, MENG Xiang-qing³. Acute isolation and culture of nerve cell from the cotton bollworm and the patch\|clamp study on the voltage-gated ion channels in the cultured neurons[J]. , 2001, 44(4): 422-427.

[1]	艾东, 林荣华, 王猛, 梁晓贺, 于彩虹. 棉铃虫可溶型海藻糖酶的化学修饰[J]. , 2018, 61(7): 801-807.
[2]	李兆群, 张帅, 周淑芬, 雒珺瑜, 崔金杰. 棉铃虫气味结合蛋白HarmOBP16的组织表达谱及配基结合特性分析[J]. , 2017, 60(8): 891-899.
[3]	王芹芹, 崔丽, 王奇渊, 杨宏宇, 芮昌辉. 棉铃虫对茚虫威的抗性机理: PBO, DEF和DEM的增效作用及解毒酶活性[J]. , 2017, 60(8): 912-919.
[4]	公玲玲, 张丹丹, 郑曰英, 于佃平, 肖玉涛, 曲爱军. 棉铃虫ABC转运蛋白ABCG1的基因克隆、亚细胞定位及其与Cry1Ac毒力的关系[J]. , 2017, 60(3): 297-308.
[5]	王冰洁, 袁向东, 赵曼, 刘臣, 陈琳, 梁革梅. 棉铃虫中肠钙粘蛋白、氨肽酶N及碱性磷酸酯酶的抗血清对Cry1Ac和Cry2Aa毒力的影响[J]. , 2016, 59(9): 977-984.
[6]	于彩虹, 艾东, 梁晓贺, 王振波, 郭建军, 姜辉, 林荣华. 栗精碱对棉铃虫中肠组织可溶型海藻糖酶的抑制效应[J]. , 2016, 59(3): 301-308.
[7]	张帅, 马艳, 闵红, 于晓庆, 李娜, 芮昌辉, 高希武. 华北棉区主要害虫抗药性监测与治理技术示范[J]. , 2016, 59(11): 1238-1245.
[8]	董钧锋, 宋月芹, 孙九光, 闫志宁, 孙亚兰, 王琛柱. 棉铃虫齿唇姬蜂嗅觉受体基因 CchlOrco 的克隆及组织表达谱分析[J]. , 2015, 58(6): 603-609.
[9]	石庆型, 罗庆怀, 赵龙, 周正湘, 何广全, 韦卫. 与中红侧沟茧蜂生境与寄主定位相关的玉米及棉铃虫幼虫体表挥发性成分的提取与鉴定[J]. , 2015, 58(3): 244-255.
[10]	陈伟, 徐卫华. 棉铃虫转录因子c-Myc基因在滞育和非滞育蛹脑中的表达分析及多克隆抗体制备[J]. , 2015, 58(2): 115-121.
[11]	邓盼, 马伟华, 李国清. 棉铃虫幼虫自相残杀习性与其龄期和食物营养的相关性（英文）[J]. , 2015, 58(2): 175-180.
[12]	李慧, 费东亮, 胡影, 马鸣潇. 中华蜜蜂幼虫原代细胞培养及中华蜜蜂囊状幼虫病毒在培养的细胞中的复制[J]. , 2015, 58(12): 1362-1367.
[13]	陈斌, 鲜鹏杰, 乔梁, 周勇. 昆虫钠离子通道基因突变及其与杀虫剂抗性关系的研究进展[J]. , 2015, 58(10): 1116-1125.
[14]	陈伟, 徐卫华. 棉铃虫Wnt-1基因克隆、多克隆抗体制备及在滞育和非滞育蛹脑中的表达检测[J]. , 2015, 58(1): 15-21.
[15]	曹婧, 欧阳芳, 戈峰, 杨中侠, 肖铁光. 取食Bt棉与玉米的越冬代棉铃虫抗寒性特征比较[J]. , 2015, 58(1): 45-52.