棉铃虫转录因子c-Myc基因在滞育和非滞育蛹脑中的表达分析及多克隆抗体制备

›› 2015, Vol. 58 ›› Issue (2): 115-121.

棉铃虫转录因子c-Myc基因在滞育和非滞育蛹脑中的表达分析及多克隆抗体制备

陈伟^1,*, 徐卫华²

（1. 广东药学院生命科学与生物制药学院, 广东省生物技术候选药物研究重点实验室, 广州 510006; 2. 中山大学生命科学学院, 有害生物控制与资源利用国家重点实验室, 广州 510275）

出版日期:2015-02-20 发布日期:2015-02-20
作者简介:陈伟, 男, 1980年生, 湖南南县人, 博士, 主要从事昆虫生理生化与分子生物学研究, E-mail: thinker98@163.com

Gene expression profiling and polyclonal antibody preparation of the transcription factor c-Myc in the brain of diapause and non-diapause pupae of the cotton bollworm, Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuiadae)

CHEN Wei^1,*, XU Wei-Hua²

(1. Guangdong Province Key Laboratory for Biotechnology Drug Candidates, School of Biosciences and Biopharmaceutics, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China; 2. State Key Laboratory of Biocontrol and Institute of Entomology, School of Life Sciences, Sun YatSen University, Guangzhou 510275, China)

Online:2015-02-20 Published:2015-02-20

摘要/Abstract

摘要： 【目的】c-Myc是近年来研究较多的转录因子，也是受Wnt/β-catenin信号通路调节的重要靶标。本研究旨在克隆棉铃虫 Helicoverpa armigera c-Myc基因，从核酸水平初步调查 c-myc 在滞育和非滞育蛹脑中的表达情况，同时制备其蛋白的多克隆抗体。【方法】通过RACE方法克隆棉铃虫 c-myc 基因的cDNA，运用RT-PCR方法比较滞育和非滞育蛹脑中Har-c-myc基因的表达情况。根据获取的序列构建原核表达载体，在大肠杆菌 Escherichia coli 中进行表达，纯化后免疫新西兰兔，制备了多克隆抗体。【结果】克隆了棉铃虫 c-myc 基因，核酸水平的研究表明滞育蛹脑中 c-myc 表达水平明显低于非滞育蛹脑。成功地在大肠杆菌中表达了c-Myc部分肽段并通过镍柱纯化获得了较纯的重组蛋白。制备的c-Myc抗体效价达到了1:125 000。【结论】滞育蛹脑中 Har-c-myc 的表达下调。获得了抗棉铃虫c-Myc的多克隆抗体。本研究的成果为后续进一步深入研究棉铃虫Wnt/β-catenin信号通路在棉铃虫发育中的作用奠定了基础。

关键词: 棉铃虫, 滞育, 转录因子, c-Myc, 多克隆抗体, Wnt/β-catenin信号通路

Abstract: 【Aim】 c-Myc is an intensively studied transcription factor and also an important downstream target of Wnt/β-catenin signaling pathway. The objective of this research was to clone the c-myc cDNA from Helicoverpa armigera , to investigate the expression of Har-c-myc in mRNA level, and to prepare polyclonal antibody against Har-c-Myc. 【Methods】 Har-c-myc was cloned by RACE. The mRNA levels of Har-c-myc in the brain of non-diapause and diapause pupae were investigated by RT-PCR. Prokaryotic expression vector of Har-c-myc was constructed and the recombinant protein was expressed in Escherichia coli . The purified recombinant protein was injected into a New Zealand rabbit to generate polyclonal antibody. The antibody titer was determined by ELISA. 【Results】 Har-c-myc cDNA was cloned successfully from H. armigera. The mRNA levels of Har-c-Myc were significantly lower in the brain of diapause pupae than in the brain of non-diapause pupae. Recombinant Har-c-Myc was successfully expressed in E. coli and purified by Ni-NTA agarose column. The titer of the antibody against Har-c-Myc was estimated by ELISA as high as 1:125 000. 【Conclusion】 The expression of Har-c-myc is down-regulated in the brain of diapause pupae. Antibody against Har-c-Myc was obtained. This study lays a foundation for further investigating the function of Wnt/β-catenin in the diapause of H. armigera.

Key words: Helicoverpa aimigera, diapause, transcription factor, c-Myc, polyclonal antibody, Wnt/β-catenin signaling pathway

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