棉铃虫中肠微粒体P450的分离纯化

摘要/Abstract

摘要：

为深入研究棉铃虫Helicoverpa armigera细胞色素P450的结构与功能，需要分离不同型的P450蛋白。作者建立了适用于棉铃虫中肠微粒体P450的纯化方法，包括聚乙二醇8000（PEG8000）沉淀、高效疏水作用色谱（HPHIC）和高效离子交换色谱（HPIEC）等连续分离步。SDS-PAGE（银染）显示，棉铃虫中肠微粒体经以上步骤分离纯化后，在含P450的馏分中检测出分子量分别为58 kD、47 kD、56 kD和45 kD的4条蛋白带。 P450的回收率为14.3%，比含量提高了39倍。

关键词: 棉铃虫, 细胞色素P450, 聚乙二醇沉淀, 高效疏水作用色谱, 高效离子交换色谱, 纯化

Abstract:

A protocol comprising PEG8000 precipitation, high performance hydrophobic interaction chromatography (HPHIC) and high performance ion exchange chromatography (HPIEC) for separation and purification of cytochrome P450 in the cotton bollworm, Helicoverpa armigera, was introduced. PEG8000 precipitation was found suitable for pre-fractionation of the midgut microsomes P450 in H. armigera. The favorable conditions of HPHIC and HPIEC for purifying microsomal P450 were established. Following purification, four proteins with molecular weight of 58 kD, 47 kD, 56 kD and 45 kD were detected in the fractions with cytochrome P450 absorbance peak by silverstaining SDS-PAGE gel. The recovery rate of P450s was 14.3%, and the P450 purity was increased by 39-fold.

Key words: Helicoverpa armigera, cytochrome P450, PEG precipitation, high performance hydrophobic interaction chromatography, high performance ion exchange chromatography, purification

郑明奇^1,2，张文吉²，邱星辉^1*, 冷欣夫¹. 棉铃虫中肠微粒体P450的分离纯化[J]. , 2005, 48(3): 359-364.

ZHENG Ming-Qi^1,2,ZHANG Wen-Ji², QIU Xing-Hui^1*, LENG Xin-Fu¹. Partial purification of microsomal P450s from midgut of the cotton bollworm, Helicoverpa armigera[J]. , 2005, 48(3): 359-364.

[1]	张百重, 苏栩, 卢留洋, 甄丛爱, 朱斌, 李亚设, 董文阳, 汪耿, 胥燕博, 孔凡彬, 刘润强, 陈锡岭, 高希武. 三种杀虫剂亚致死剂量对草地贪夜蛾细胞色素P450基因表达的影响[J]. 昆虫学报, 2020, 63(5): 565-573.
[2]	马百伟, 刘晓岚, 常亚军, 谢桂英, 陈文波, 刘杨, 赵新成, 王桂荣. 利用单感器记录与神经元示踪结合对棉铃虫主要性信息素感器内神经元投射的鉴定[J]. 昆虫学报, 2020, 63(4): 413-420.
[3]	王婷婷, 索倩, 孙晓燕, 马跃敏, 刘凯于, 彭建新, 彭蓉 . 棉铃虫激活增强子结合蛋白AP-4基因的原核表达、多克隆抗体制备、表达谱分析及功能鉴定[J]. 昆虫学报, 2019, 62(9): 1028-1037.
[4]	王芹芹, 崔丽, 王奇渊, 王立, 谢娜, 袁会珠, 芮昌辉. 茚虫威亚致死浓度对茚虫威敏感性降低的棉铃虫生物学参数及解毒酶活性的影响[J]. 昆虫学报, 2019, 62(8): 960-969.
[5]	张亚坤, 邓中原, 谷少华, 李显春. 棉铃虫剂量补偿相关基因Hamsl1的鉴定与功能分析[J]. 昆虫学报, 2019, 62(7): 799-813.
[6]	赵洁, 魏倩, 任苏伟, 刘小宁. 棉铃虫叉头框蛋白A类似蛋白基因HarmFoxAl的克隆及表达谱分析[J]. 昆虫学报, 2019, 62(6): 672-684 .
[7]	刘小飞, 孟建玉, 赵晓超, 张长禹. 棉铃虫c-Jun氨基末端激酶基因的克隆、表达谱及对UV-A胁迫的响应[J]. 昆虫学报, 2019, 62(4): 407-417.
[8]	姚雪, 李琳红, 魏纪珍, 席玉强, 杜孟芳, 崔江宽, 安世恒, 刘晓光. 棉铃虫酪氨酸羟化酶基因的分子特性及功能分析[J]. 昆虫学报, 2019, 62(3): 294-303.
[9]	麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔, 马纪, 刘宁, 王威, 李梦鸽, 古新蓉, 王新, 刘小宁. 棉铃虫Ⅳ型几丁质酶的基因克隆、酶学性质及表达谱[J]. 昆虫学报, 2019, 62(2): 170-180.
[10]	梁振普, 王亮, 李鹏娟, 王朝兴, 肖宇博, 张小霞. 棉铃虫围食膜的蛋白质组鉴定[J]. 昆虫学报, 2019, 62(2): 181-192.
[11]	陈秀琳, 苏丽, 陈丽慧, 李怡萍, 仵均祥, 李广伟. 梨小食心虫Minus-C气味结合蛋白的分子克隆、表达谱及结合特性分析[J]. , 2018, 61(7): 771-783.
[12]	艾东, 林荣华, 王猛, 梁晓贺, 于彩虹. 棉铃虫可溶型海藻糖酶的化学修饰[J]. , 2018, 61(7): 801-807.
[13]	闫硕, 刘彦君, 张馨方, 朱家林, 李贞, 刘孝明, 张青文, 刘小侠. 棉铃虫生物钟基因HeDbt的克隆和表达模式分析[J]. 昆虫学报, 2018, 61(12): 1393-1403.
[14]	张夏瑄, 郭孟博, 刘一鹏, 王冰, 王桂荣. 棉铃虫离子型受体基因HarmIR8a的克隆及表达定位[J]. 昆虫学报, 2018, 61(11): 1263-1271.
[15]	张伟妮, 胡崇伟, 张梦馨, 韩威超, 黄小红. 意大利蜜蜂N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质分析(英文)[J]. , 2018, 61(10): 1153-1159.

棉铃虫中肠微粒体P450的分离纯化

Partial purification of microsomal P450s from midgut of the cotton bollworm, Helicoverpa armigera

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