【目的】MiRNAs在昆虫变态发育过程中发挥非常重要的作用。对家蚕Bombyx mori miRNAs及靶基因的研究将有助于阐明miRNAs参与调控家蚕变态发育的分子机制。【方法】往家蚕5龄第2天幼虫血淋巴注射蜕皮激素20E后，qRT-PCR检测miR-2769在家蚕脂肪体中的表达；通过生物信息学方法预测家蚕miR-2769的靶基因；利用双荧光酶报告载体系统分析miR-2769与预测靶基因BmE75B的互作；qRT-PCR检测miR-2769及其靶基因BmE75不同剪接体在家蚕不同发育时期(幼虫、蛹和成虫)和幼虫不同组织(头、表皮、丝腺、脂肪体、精巢、卵巢、马氏管、中肠和血淋巴)中的表达量。【结果】研究结果表明，miR-2769可通过与家蚕BmE75B的3′UTR区结合位点的互作，显著抑制荧光素酶报告基因的表达。qRT-PCR结果表明，miR-2769和BmE75A/BmE75B在20E诱导家蚕脂肪体中表达趋势相反。时空表达分析结果表明，miR-2769与BmE75的不同剪接体在家蚕不同发育时期和不同组织中均具有特异性表达特征。在家蚕变态发育的不同阶段，miR-2769和BmE75A的表达量均较低，而BmE75B在蛹期表达量较高，BmE75C在5龄末幼虫和蛹早期有极高表达水平。此外，miR-2769与BmE75不同剪接体均存在一定程度的表达负相关。在家蚕5龄幼虫血淋巴中miR-2769可促进BmE75A的表达，在脂肪体中miR-2769可促进BmE75B的表达，而在其他组织中miR-2769抑制BmE75不同剪接体的表达。【结论】家蚕miR-2769可通过与BmE75B的3′UTR区的互作对BmE75不同剪接体的表达进行负调控。

【目的】本研究克隆亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis卵黄原蛋白(vitellogenin, Vg)基因，分析其表达模式，旨在探究UV-A胁迫对亚洲玉米螟Vg基因表达及生殖力的影响。【方法】采用RT-PCR和RACE技术克隆亚洲玉米螟Vg基因的全长，并用生物信息学方法分析其特征；利用RT-qPCR检测亚洲玉米螟不同发育阶段(卵、1-5龄幼虫、蛹和成虫)、雌成虫不同组织(头、足、表皮、卵巢、中肠和脂肪体)中和雌成虫在UV-A胁迫不同时间(0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5和4 h)下该基因的相对表达量。测定UV-A照射不同时长(0, 1, 2, 3和4 h/d)后亚洲玉米螟成虫的生殖及F₁代发育情况。【结果】克隆获得亚洲玉米螟Vg基因的序列，命名为OfVg(GenBank登录号: MK782978)。该基因全长5 760 bp，开放阅读框(ORF)长5 331 bp，编码1 776个氨基酸，蛋白相对分子量为202.10 kD，等电点为9.06。OfVg包含Vg-N, DUF 1943D和VWD 3个功能结构域，无跨膜区结构。系统发育分析表明，OfVg与鳞翅目其他昆虫的Vg的亲缘关系最近。发育表达谱表明，OfVg基因在雌成虫中表达量显著高于其他龄期的表达量，且在雌虫羽化24 h时OfVg表达量最高；组织表达谱表明，OfVg基因在雌成虫脂肪体中特异表达。UV-A照射能诱导雌成虫OfVg的表达，随着照射时间的延长，其表达量先下降再快速上升，在照射3.5 h时其表达量最高，然后骤降；UV-A处理1, 2和3 h/d雌成虫的产卵量显著增加，且F₁代幼虫发育历期显著延长。【结论】OfVg基因在亚洲玉米螟不同发育阶段、雌成虫不同组织中和UV-A照射不同时间的雌成虫中差异表达。本研究为深入研究UV-A胁迫对亚洲玉米螟发育和繁殖的影响奠定了基础。

【目的】筛选与意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica哺育蜂学习记忆密切相关的基因。【方法】在人工组建意大利蜜蜂蜂群中收集10日龄哺育蜂、21日龄哺育蜂、21日龄采集蜂，通过喙伸反应(proboscis extension reflex, PER)实验测定这3组样本之间学习记忆能力的差异。利用RNA-seq技术对具有学习能力和不具有学习能力的10日龄哺育蜂和21日龄哺育蜂脑中基因表达量进行全面分析，筛选出与哺育蜂学习记忆密切相关的差异表达基因(DEGs)，并对这些差异表达基因进行GO和KEGG富集分析。qPCR检测随机选取的3个DEGs(上调基因TpnCⅢa和MED23以及下调基因Pkc)在具有学习能力和不具有学习能力的10日龄哺育蜂和21日龄哺育蜂脑中的表达量。【结果】PER实验结果显示，经过5次训练后，意大利蜜蜂21日龄哺育蜂的学习能力显著高于10日龄哺育蜂的，而21日龄哺育蜂和21日龄采集蜂的学习能力无显著差异；同样地，21日龄哺育蜂的记忆能力显著高于10日龄哺育蜂的，而21日龄哺育蜂和21日龄采集蜂的记忆能力无显著差异。RNAseq分析筛选到88个与哺育蜂学习记忆密切相关的DEGs，其中18个上调表达，70个下调表达。GO富集结果显示，上调DEGs在生物学进程分类中富集的基因数最多，主要富集在信号转导、蛋白质加工修饰相关；下调DEGs也是在生物学进程分类中富集的基因数最多，主要富集在转录、信号转导、蛋白质生物合成相关，其中显著性富集在转录相关。KEGG富集结果显示，下调DEGs显著性富集在吞噬、光转导、AGERAGE信号通路。qPCR结果显示差异表达基因TpnCⅢa, MED23和Pkc在具有学习能力和不具有学习能力的10日龄哺育蜂和21日龄哺育蜂脑中的表达水平的变化趋势与RNA-seq数据中的变化趋势一致。【结论】PER实验表明日龄是影响意大利蜜蜂哺育蜂的学习和记忆能力的重要因素；同时本研究获得学习后哺育蜂脑部的基因表达变化趋势和富集分析，为深入研究哺育蜂学习记忆的分子机制奠定了重要的理论基础。

【目的】研究蚯蚓提取物对家蚕Bombyx mori中肠组织氧化应激及抗氧化酶含量的影响，探究蚯蚓提取物的抗氧化功能。【方法】分别给家蚕5龄幼虫饲喂蚯蚓(赤子爱胜蚓Eisenia foetida)提取液原液的50, 100和200倍稀释液处理后的桑叶，测定处理6 d后家蚕中肠组织中氧化损伤产物丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量；利用qRT-PCR检测家蚕中肠组织中抗氧化酶关键基因(Cat, Sod和GSH-Px)的mRNA表达水平；同时采用ELISA法检测中肠组织中抗氧化酶［过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)］含量及总抗氧化能力(T-AOC)。【结果】与对照组相比，50, 100和200倍稀释组家蚕中肠组织中MDA, CAT, SOD和GSH-Px含量及T-AOC均差异不显著，200倍稀释组LDH含量显著降低了9.85%，100倍稀释组中肠中Cat和GSH-Px的表达量均显著高于对照组，3个稀释组中Sod的表达量均显著高于对照组。【结论】添食蚯蚓提取物可通过降低家蚕中肠LDH含量、提高抗氧化酶基因的表达水平进而提高家蚕的抗氧化能力。

【目的】探索雌性中华蜜蜂Apis cerana cerana胚胎组织发育过程。【方法】在正常蜂群中，用蜂王产卵控制器将蜂王限制在工蜂巢房的巢脾上产卵1 h，蜂王在工蜂巢房中产下的卵是受精的雌性卵，将有卵的巢脾割下放入恒温恒湿箱中培养。恒温恒湿箱中样本所在的位置温度严格控制在35±0.2℃，相对湿度75%±5%。把限王产卵1 h内获得的蜜蜂卵作为0 h胚胎，每隔4 h取样一次。采用石蜡切片技术，对二倍体雌性中华蜜蜂胚胎发育过程进行观察。【结果】根据胚胎发育过程中的形态特征，雌性中华蜜蜂胚胎发育过程划分为4个阶段：(1)卵裂期(0-12 h)，活质体迁移到卵的表面，呈双层排列；(2)胚盘形成期(12-28 h)，活质体排列为单层，并形成细胞膜；(3)胚层形成期(28-40 h)，侧板覆盖中板，两者在腹中线愈合；(4)胚胎器官系统形成期(40-68 h)。【结论】本研究明确了雌性中华蜜蜂胚胎发育过程的形态变化，进行了阶段划分并明确了各发育阶段的形态特征及对应的发育时间。本项研究结果有助于开展与蜜蜂胚胎发育的相关蜜蜂生态学、发育生物学、营养学等课题深入研究。

【目的】本研究旨在通过差异表达基因(differentially expressed gene, DEG)分析以及毒力因子和其他侵染相关因子分析，在转录组水平揭示东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica的分子机制。【方法】基于前期已获得高质量的东方蜜蜂微孢子虫纯化孢子(NcCK)及侵染意大利蜜蜂工蜂7和10 d的东方蜜蜂微孢子虫(分别为NcT1和NcT2)转录组数据，根据P≤0.05且｜log₂(Fold change)｜≥1的标准，通过比较分析筛选出NcCK vs NcT1, NcCK vs NcT2和NcT1 vs NcT2比较组的DEG。通过相关生物信息学软件对上述DEG进行Venn分析、GO分类和KEGG代谢通路富集分析。根据Nr和KEGG数据库注释信息和相关文献进行对东方蜜蜂微孢子虫的毒力因子和侵染相关因子的统计和分析。通过RT-qPCR验证转录组数据及DEG表达趋势。【结果】从NcCK vs NcT1, NcCK vs NcT2和NcT1 vs NcT2比较组分别鉴定出1 397, 1 497和52个DEG。Venn分析结果显示各比较组共有的上调和下调基因分别为10和1个。GO分类结果显示，NcCK vs NcT1和NcCK vs NcT2中DEG富集数最多的功能条目为代谢进程、细胞进程、单组织进程、细胞、细胞组件、细胞器、催化活性和结合，而NcT1 vs NcT2中DEG富集数最多的是代谢进程、细胞进程、单组织进程、催化活性和结合。KEGG代谢通路富集分析结果显示，NcCK vs NcT1和NcCK vs NcT2中DEG分别富集到80和79条通路；富集在糖酵解/糖异生和MAPK信号通路的上调基因数量多于下调基因。毒力因子分析结果显示，孢壁蛋白9基因和孢壁蛋白12基因在NcCK vs NcT1和NcCK vs NcT2中均下调表达，孢壁蛋白8基因仅在NcCK vs NcT1中表达量下调；此外孢壁蛋白前体基因、孢壁和锚定盘复合蛋白基因、几丁质合酶基因、极管蛋白基因、蓖麻毒素B凝集素基因的表达水平在NcCK vs NcT1和NcCK vs NcT2中表现为上调。侵染相关因子分析结果表明，糖酵解途径的3个关键酶基因在NcCK vs NcT1和NcCK vs NcT2中上调表达；3个涉及ATP/ADP移位酶的基因在NcCK vs NcT1和NcCK vs NcT2中上调表达，但有1个表达量下调；2个涉及ABC转运蛋白的基因在NcCK vs NcT1和NcCK vs NcT2中上调表达，另有4个下调表达。RT-qPCR结果证实了本研究中转录组数据及DEG表达趋势的真实可靠性。【结论】本研究通过比较分析解析东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程的转录组动态，揭示了孢壁蛋白、孢壁和锚定盘复合蛋白、几丁质酶、极管蛋白和蓖麻毒素B凝集素等毒力因子编码基因，以及己糖激酶、丙酮酸激酶、6-磷酸果糖激酶、ATP/ADP移位酶和ABC转运蛋白等侵染相关因子编码基因在病原增殖中扮演重要角色，为阐明东方蜜蜂微孢子虫的侵染机制提供了基础。

【目的】本研究旨在探明低温条件下麦长管蚜Sitobion avenae的存活率和快速冷驯化反应，以期为该虫耐寒性的研究和准确预测预报提供依据。【方法】测定麦长管蚜实验室种群各发育阶段的过冷却点和结冰点；测定1龄若蚜和未产仔成蚜分别在-7.0~-11.0℃极端低温下暴露3 h和在0℃冷驯化1~5 h后暴露于致死温度3 h，再转移至15℃ 72 h后的存活率；调查自然条件下陕西杨凌小麦整个生育期麦长管蚜的种群动态。【结果】麦长管蚜1龄和2龄若蚜的过冷却点波动范围较小，分别为-27.4~-19.2℃和-27.3~-18.3℃；3龄若蚜、4龄若蚜和成蚜的过冷却点波动范围较大，分别为-27.4~-10.7℃, -26.7~-12.5℃和-26.7~-11.2℃。麦长管蚜的过冷却点和结冰点随龄期增加均显著升高，其中成蚜的过冷却点显著高于1龄和2龄若蚜。3龄若蚜、4龄若蚜和成蚜的过冷却点在不同翅型之间不存在显著性差异。低温存活率分析表明，麦长管蚜1龄若蚜和无翅成蚜的致死温度(80%死亡率)分别在-10.5℃和-8.1℃左右。0℃快速冷驯化显著提高了麦长管蚜1龄若蚜和无翅成蚜在极端低温下的存活率，其中冷驯化2 h时的存活率最高。2018-2019年小麦生育期田间调查结果表明，麦长管蚜能以孤雌生殖若蚜和成蚜在陕西杨凌越冬。【结论】麦长管蚜具有较强的低温适应能力，在陕西杨凌能以孤雌生殖蚜成功越冬。因此，其本地越冬存活个体是陕西杨凌小麦田的早春虫源之一。

【目的】揭示日龄和交配对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis雄蛾内生殖器官的影响，以及亚洲玉米螟雄蛾的交配状态和性信息素诱捕之间的关系。【方法】采用行为学和生殖器解剖技术，研究不同日龄和交配状态亚洲玉米螟雄蛾内生殖器特征，并将其与田间性信息素诱捕雄蛾进行比较。【结果】除了精巢、输精管、储精囊、附腺、复射精管和单射精管外，亚洲玉米螟雄蛾内生殖系统还包含1对附腺囊，同时单射精管非角质化区分为5段(PS1-5)，PS1又细分为5区 (PS1Ⅰ-Ⅴ)。生殖器内含物可分为5级(0-4级)，存在充满和未充满生殖器两种状态。1日龄雄蛾内生殖系统不同器官的内含物等级存在差异，但是日龄对雄蛾生殖系统内含物等级无明显影响。交配后0 h亚洲玉米螟雄蛾，除输精管、储精囊和附腺囊外，其余生殖器官内含物等级较未交配雄蛾的均发生显著变化。随着交配后时间的增加，雄蛾生殖器内含物等级逐渐恢复，各器官内含物等级恢复的速度存在差异，交配后60 h所有内含物等级均恢复到未交配状态。但是直到交配后228 h，交配雄蛾PS5内含物仍然表现出断裂等形态特征，和未交配雄蛾存在差异。性信息素引诱雄蛾中有60.9%的生殖系统表现出未交配雄蛾特征。【结论】利用PS5内含物的形态可以鉴别亚洲玉米螟雄蛾的交配状态，性信息素群集诱杀的亚洲玉米螟雄蛾大部分是未交配。本研究结果为亚洲玉米螟雄蛾交配状态的判定和蛾类害虫性信息素测报和防治的有效性提供了一定依据。

【目的】硬皮肿腿蜂Sclerodermus spp.在寄生蜂中独有雌蜂合作繁育的准社会行为。本研究旨在明确该合作繁育行为在非自然寄主天牛上有何表现。【方法】随机选取松褐天牛Monochamus alternatus幼虫(体重范围0.16~0.44 g)，个体称体重后分别接1, 2和4头已交配但尚未产卵的川硬皮肿腿蜂S. sichuanensis雌蜂即母蜂，观测母蜂产卵前期和子代发育表现等参数，分析寄主体重(连续自变量)和接蜂数(分类自变量)对这些参数的影响。【结果】对所有观测参数的分析未发现寄主体重与接蜂数这两因素之间存在互作影响，说明这两个因素独立影响观测特征。川硬皮肿腿蜂母蜂产卵前期随寄主体重增大而逐渐延长，但在母蜂数较多的情况下产卵前期缩短：接4头蜂处理下产卵前期比接1和2头处理下的产卵前期分别缩短18.3%和20.6%。按照母蜂平均产子代蜂数量(蜂均产蜂量)计算，接1头蜂处理下的蜂均产蜂量分别是接2和4头蜂处理下的蜂均产蜂量的1.5和3.3倍；蜂均产蜂量不受寄主体重的影响。子代蜂性比(雄蜂占比)在接蜂数较多处理下略有增大，但仍然极端偏雌；性比不受寄主体重的影响。子代卵至成虫存活率在接4头母蜂处理下最低，比接1和2头母蜂处理下分别降低37.4%和30.5%；子代卵至成虫存活率不受寄主体重的影响。子代蜂体型(后足胫节长度)随寄主体重增大而增大，但不受接蜂数的影响。【结论】本研究结果说明，在合作利用体型较大的非自然寄主时，母蜂数量比寄主体型大小对川硬皮肿腿蜂的合作繁育行为产生更大的影响。

【目的】发现支配权衡(discovery-dominance trade-off)在物种间的竞争起着重要作用。本研究旨在了解不同强度的红火蚁Solenopsis invicta入侵对本地蚂蚁群落物种的发现支配权衡的影响，从而探讨红火蚁与本地蚂蚁的竞争机制。【方法】于2017年10-11月，在云南省楚雄州牟定县的一滇橄榄种植基地利用诱饵法和陷阱法结合的方式引诱和收集蚂蚁，观察并记录常见蚂蚁种类的发现能力、招募能力、支配能力、最早发现诱饵的时间段及个体数。【结果】红火蚁的入侵显著影响了本地蚂蚁群落物种的发现-支配权衡。强入侵区(5.6个活动蚁巢/100 m²)蚂蚁群落中物种的相对发现能力和相对支配能力不存在相关性；弱入侵区(0.14个活动蚁巢/100 m²)蚂蚁群落中两者存在较弱的负相关性，但不显著；对照区(无蚁巢)中两者存在显著负相关性(强入侵区：r=-0.01, P=0.97；弱入侵区：r=-0.60, P=0.21；对照区：r=-0.81, P=0.04)。强入侵区的红火蚁种群普遍在5 min之内就能发现诱饵，而弱入侵区的种群需要10~60 min才能发现诱饵(χ²₍₅₎=33.37, P<0.001)；强入侵区的红火蚁种群在发现诱饵频率和支配行为频率上均显著高于弱入侵区(发现诱饵频率: χ²₍₁₎=17.27, P<0.001; 支配行为频率: χ²₍₁₎=6.25, P=0.03)，而招募频率在两种入侵区间无显著差异(χ²₍₁₎=1.75, P=0.55)。【结论】红火蚁入侵打破了本地蚂蚁群落物种的发现-支配权衡，而且随着红火蚁种群规模的增大，从能够影响到完全打破这种发现支配权衡。研究结果可为了解红火蚁入侵机制提供证据。

【目的】近年来随着交通条件的改善，每年有大量西方蜜蜂Apis mellifera蜂场从全国各地赶到云南放蜂。本研究旨在揭示西方蜜蜂这一外来蜂种对云南本地传粉蜂种类、数量及其物种多样性的影响。【方法】采用马来氏网收集、调查了云南省罗平县西方蜜蜂高放蜂密度试验点(鲁特和走马田)、中放蜂密度试验点(外纳和下阿列)和低放蜂密度试验点(马把和下庄科)共6个试验点包括山林生境和农田生境的本地传粉蜂群落结构；并对比分析了不同放蜂密度、不同生境下各试验点传粉蜂物种多样性指数(H′)、均匀度指数(J′)及丰富度指数(Dm)之间的差异。【结果】采集到的1 715头本地传粉蜂隶属于10科53种，其中蜜蜂科(Apidae)、隧蜂科(Halictidae)和胡蜂科(Vespidae)为优势类群，东方蜜蜂Apis cerana和切淡脉隧蜂Lasioglossum excisum为优势种。在放蜂密度(试验点周围3 km范围内西方蜜蜂蜂群数量)为723~2 750群这一变动范围内，各试验点本地传粉蜂物种数量、个体数量均随西方蜜蜂放蜂密度的增大而减少，物种多样性指数(H′)及丰富度指数(Dm)也相应降低，但西方蜜蜂放蜂密度对本地传粉蜂均匀度指数(J′)没有影响。此外，在相同放蜂密度下，山林生境的本地传粉蜂物种多样性均显著高于农田生境。【结论】云南罗平本地传粉蜂的群落结构及物种多样性受西方蜜蜂放蜂密度的影响，在放蜂密度从723~2 750群这一变动范围内，放蜂密度越大，本地传粉蜂的个体数、物种数、多样性指数和丰富度指数越小。本研究结果为进一步研究合理控制西方蜜蜂放蜂密度以保护云南本地传粉蜂种的多样性提供了思路。

【目的】测定和分析甜果螨Carpoglyphus lactis线粒体基因组全序列，并在线粒体基因组水平探讨其在真螨总目(Acariformes)中的系统发育地位，为真螨总目分类及果螨科线粒体基因组研究提供科学依据。【方法】挑取实验室饲养的甜果螨成螨，用传统的酚氯仿抽提法和试剂盒提取法提取甜果螨基因组DNA。然后采用节肢动物或螨类线粒体基因的通用引物PCR扩增出甜果螨线粒体基因cox1, cob, rrnS和nad4-nad5的部分序列；再设计种特异性引物进行Long-PCR扩增和步移法测序，测出甜果螨线粒体基因组全序列。应用SeqMan, SEQUIN 9.0和tRNAscan等生物信息学软件，对甜果螨线粒体基因组的基因结构等进行生物信息学分析。最后基于17种真螨总目螨类的蛋白质编码基因，采用最大似然法构建系统发育树。【结果】甜果螨线粒体全基因组总长为14 060 bp(GenBank登录号: MN073839)，为典型的闭合双链DNA分子，共由37个基因组成，包括13个蛋白质编码基因(PCGs)、22个tRNA基因和2个rRNA基因；甜果螨线粒体基因组还包括1个大的非编码区(large non-coding region, LNR)。系统发育分析结果显示，甜果螨Carpoglyphus lactis属于无气门亚目粉螨总科(Acaroidae)，与椭圆食粉螨Aleuroglyphus ovatus构成一支。粉螨总科(Acaroidae)和薄口螨总科(Histiostomatoidae)聚成一簇，与痒螨股(Psoroptidia)构成姐妹群。【结论】本研究首次获得并分析了甜果螨线粒体基因组全序列。甜果螨与椭圆食粉螨的亲缘关系较近。

摘要: 昆虫主要依赖其复杂且灵敏的化学感受系统来识别并区分外界环境中的各种化学信号。嗅觉是负责嗅觉信号传导的感官方式，能够引起昆虫觅食、产卵、交配和躲避天敌等对生存和繁殖至关重要的行为反应。在嗅觉感知过程中，气味结合蛋白(odorant binding proteins, OBPs)最先与外界脂溶性化学物质相互作用，并将其转运至化学受体神经元上，激活树突膜表面分布的嗅觉受体(olfactory receptors, ORs)，是嗅觉系统正常运行的必需蛋白。近年来，随着高通量测序和分子生物学技术的快速发展，越来越多的昆虫OBPs相继得以鉴定并开展功能研究。昆虫OBPs是一类可溶性的小分子蛋白，一般由6个α-螺旋构成一个稳定、紧密的疏水性结合腔，其构象变化因昆虫种类和配体结构不同而有所差异。OBPs的分布不受限于嗅觉器官，还在口器、足、中肠、腺体等非嗅觉组织中表达，具有嗅觉识别、味觉感受、营养物质转运、信息素合成与释放、组织发育与分化等生理功能。OBPs行使以上功能的共同特性为结合和溶解包括信息素组分、普通气味分子和非挥发性物质等的疏水性小分子物质。昆虫OBPs的稳定性和多功能性暗示其可广泛应用于害虫防治、生物传感器、分析化学、生态学等多个领域。本文对过去20多年来昆虫OBPs的相关研究进行综述，为进一步深入开展OBPs的功能研究提供理论参考。