【目的】分析低温驯化后水椰八角铁甲Octodonta nipae体内各种生理活性物质含量的变化，为揭示水椰八角铁甲耐寒机制提供理论基础。【方法】以25℃处理为对照，将水椰八角铁甲各虫态于12.5, 15, 17.5和20℃驯化处理10 d后，比较其体内的游离水、蛋白质、氨基酸、粗脂肪、甘油和可溶性糖原等生理活性物质含量的变化。【结果】低温驯化显著影响铁甲体内上述物质的含量水平。低温驯化能提高该铁甲体内甘油和游离氨基酸的含量，降低游离水、蛋白质、粗脂肪、可溶性糖原的含量。与对照相比，12.5℃驯化对该铁甲各虫态体内游离水含量存在显著影响(P<0.01)；经12.5, 15, 17.5和20.0℃驯化后，该铁甲各虫态体内蛋白质、粗脂肪含量与对照相比均存在显著差异(P<0.01)；经125，150和175℃驯化后，该铁甲各虫态体内游离氨基酸含量与对照存在显著差异(P<0.01)；经12.5，15.0，17.5和20℃驯化后，该铁甲各虫态（2龄幼虫除外）体内甘油含量与对照相比存在显著差异(P<0.01)；12.5, 15.0, 17.5和20℃驯化对除2龄幼虫、蛹和成虫外的铁甲其他各虫态体内可溶性糖原含量存在显著影响。经15.0℃驯化处理后铁甲各虫态体内平均甘油含量最高，比对照25℃的平均甘油含量高出约9.4倍，而经12.5℃驯化处理的虫体内的平均甘油含量仅增加3.5倍。【结论】低温驯化对水椰八角铁甲体内相关生理活性物质含量的影响效能是有限的；水椰八角铁甲可以根据不良的环境条件调节最佳的生理状况，以适应未来的环境和达到最强的适应性。

【目的】为了更好地了解昆虫气味结合蛋白（odorant binding proteins, OBPs）在梨小食心虫Grapholita molesta（Busck）嗅觉识别中的作用，并明确其与寄主挥发物的结合特性。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆梨小食心虫OBP基因；采用RT-PCR和实时定量PCR对该基因在成虫不同组织和羽化后不同日龄成虫中的表达情况进行了测定；以N-phenyl-1-naphthylamine（1-NPN）为荧光探针，采用荧光竞争结合试验对GmolOBP3蛋白的结合特性进行了分析。【结果】得到梨小食心虫一个新的气味结合蛋白基因，命名为GmolOBP3（GenBank登录号：KF395363）。GmolOBP3开放阅读框全长492 bp，编码163个氨基酸残基，预测分子量和等电点分别为18.72 kDa和4.93，呈酸性，具有典型的6个半胱氨酸位点。GmolOBP3在雌、雄成虫触角和腹部均有表达，成虫在羽化后5 d内，雌蛾触角中GmolOBP3表达量随羽化后日龄而增加，但雄蛾在羽化后第5天触角中 GmolOBP3表达量显著降低。通过构建GmolOBP3原核表达载体，在大肠杆菌Escherichia coli中诱导表达并获得了GmolOBP3重组蛋白。荧光竞争结合实验对GmolOBP3蛋白与16种寄主挥发物及4种性信息素类似物的结合力发现，在供试的4种梨小食心虫性信息素类似物中，GmolOBP3蛋白与反-8-十二碳烯醋酸酯和十二烷-1-醇不结合，而与顺-8-十二碳烯醋酸酯和顺-8-十二碳烯醇结合，但结合力较弱，结合常数分别为83.00和103.70 μmol/L；与16种寄主挥发物结合能力也不强，其中结合最强的是β紫罗酮，结合常数为49.36 μmol/L。【结论】由此推断，GmolOBP3具有选择性识别和结合各种配基的特性。

【目的】克隆小菜蛾Plutella xylostella (L.)小分子非编码RNA U6的cDNA序列，并评价其是否适合作为定量检测小菜蛾microRNA (miRNA)表达量的内参基因。【方法】本研究采用RT-PCR 克隆获得了小菜蛾4龄幼虫核小RNA(small nuclear RNA, snRNA) U6的cDNA序列，并用定量PCR法检测了U6及8种miRNAs在小菜蛾不同发育阶段及不同杀虫药剂处理后的表达稳定性。【结果】小菜蛾U6的cDNA序列全长 94 bp，与其他昆虫U6的核苷酸序列一致性达98.9%。用geNorm和RefFinder软件分析荧光定量PCR结果表明，U6在小菜蛾卵、1-4龄幼虫、蛹和成虫7个不同发育阶段表达稳定；用马拉硫磷、毒死蜱、辛硫磷、灭多威、呋喃虫酰肼、高效氯氰菊酯、氯虫苯甲酰胺、溴虫腈和Bt 9种不同作用机理的杀虫药剂处理3龄末幼虫48 h，对U6的表达水平无显著影响。【结论】小菜蛾U6表达水平不受不同发育阶段和不同杀虫药剂处理的影响，符合作为内参基因的基本特点，可作为定量PCR法评价小菜蛾miRNA或其他非编码小分子RNA表达水平的内参基因。研究结果为小菜蛾miRNA表达水平的准确定量奠定了基础。

【目的】Wolbachia 是广泛存在于昆虫体内的一类通过母系传递的共生菌，能够通过多种方式影响宿主的生殖。细胞质不亲和（CI）是Wolbachia 引起的最普遍的一种表型，即感染Wolbachia的雄性和未感染的雌性宿主交配后，胚胎发育停滞于早期阶段。但目前有关CI的分子机理还不清楚。本研究组前期实验表明，Wolbachia感染引起黑腹果蝇Drosophila melanogaster 3龄幼虫精巢中Mst84Db基因的表达显著下调。本研究的目的是进一步研究Mst84Db与CI的关系。【方法】我们体外合成了Mst84Db的双链RNA（dsRNA），注射雄性果蝇，将注射过的雄果蝇与野生雌果蝇交配，检测其繁殖力。基因表达采用定量RT-PCR方法进行检测。胚胎表型采用DAPI染色进行分析。【结果】注射dsRNA 24 h后，Mst84Db基因的表达水平发生显著下调。注射后72 h，基因表达下调幅度最大。与对照组相比，基因敲降后的雄蝇繁殖能力显著下降，与雌果蝇交配后胚胎孵化率显著低于对照组，这与Wolbachia诱导的CI现象类似。未孵化胚胎的表皮上没有体节出现，说明胚胎停滞于发育的早期。部分胚胎细胞核分裂不同步，且有染色质间桥出现，这也与CI胚胎中的细胞学表型一致。【结论】Wolbachia感染可能抑制果蝇精子发生过程中Mst84Db基因的表达，从而使精子失去正常功能，最终导致与雌性果蝇交配后，胚胎发育停滞，并最终死亡。Mst84Db基因在雄性果蝇中表达下调可能是产生CI的重要原因之一。

【目的】家蚕微孢子虫Nosema bombycis ADP/ATP转运蛋白可能参与搬运宿主细胞的能量。本研究克隆家蚕微孢子虫ADP/ATP转运蛋白基因，并进行原核表达、抗体制备及间接免疫荧光定位，为控制和防治家蚕微粒子病提供理论基础。【方法】通过同源序列比对鉴定家蚕微孢子虫N. bombycis ADP/ATP转运蛋白序列，采用生物合成的方法将编码3段面向膜内侧肽段的核酸序列拼接合成，在其两端引入BglⅡ和SalⅠ酶切位点，克隆至pUC57载体并测序，再亚克隆至含有二氢叶酸还原酶（dihydrofolate reductase，DHFR）标签的表达载体pQE40中，然后利用BamHⅠ和SalⅠ酶切获得含有DHFR标签的重组序列，并连接至pET30a（+）载体中进行诱导表达。通过SDS-PAGE、镍柱亲和层析和免疫印迹法鉴定表达蛋白，利用间接免疫荧光对ADP/ATP转运蛋白的分布进行检测。【结果】家蚕微孢子虫的ADP/ATP转运蛋白编码序列（GenBank登录号为EOB13854.1）全长1 524 bp，编码蛋白含有507个氨基酸残基，预测分子质量为59 kDa，等电点为9.35。具有12个跨膜结构域和TLC结构域，其中TLC结构域含有4个功能保守位点。与蜜蜂微孢子虫的ADP/ATP转运蛋白比较，氨基酸序列一致性达30%。系统进化分析表明微孢子虫ADP/ATP转运蛋白聚为一类，具有共同的起源。成功构建了NbADP/ATP-△TM-DHFR-pET30a原核表达重组质粒，目的基因获得表达，其融合蛋白分子量约为37 kDa，纯化重组蛋白并制备了多克隆抗体。免疫印迹分析表明，成熟微孢子虫中表达ADP/ATP转运蛋白；间接免疫荧光定位结果显示，家蚕微孢子虫孢子ADP/ATP转运蛋白定位于孢子质膜上。【结论】本研究将为阻断微孢子虫能量来源，达到控制和防治家蚕微粒子病提供新的思路。

【目的】苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)在昆虫细胞中连续传代以后，会出现从多多角体表型到少多角体表型的转变，这种转变与一个编码25 kDa蛋白的基因（few polyhedra, fp25k）突变失活有关。杆状病毒的fp25k基因突变后产生的包涵体（多角体）衍生病毒粒子变少而出芽型病毒粒子增加，会降低外源基因在杆状病毒表达系统中的表达。本研究拟改造fp25k并构建能持续表达FP25K蛋白的转基因昆虫细胞，以克服杆状病毒, fp25k基因易突变导致的表达系统缺陷。【方法】本实验通过改造杆状病毒, fp25k基因在细胞传代过程中容易产生突变的位点，得到 mfp25k，并将mfp25k构建到pIZT/V5-His载体上，重组载体转染Sf9细胞，通过Zeocin抗性筛选逐步淘汰未成功转化的Sf9细胞。【结果】成功改造AcMNPV的, fp25k基因的TTAA位点，得到pIZT-mfp25k重组载体。重组载体成功转染Sf9细胞，通过Zeocin抗性筛选后获得基因组中带有mfp25k的Sf9-mfp25k稳定的转基因细胞系。用AcMNPV的fp25k突变型病毒AcP2感染转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系与正常Sf9细胞，发现转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系表达的FP25K蛋白可弥补病毒, fp25k基因突变的缺陷。【结论】建立的Sf9-mfp25k转基因昆虫细胞系通过细胞表达FP25K蛋白，可以弥补因杆状病毒fp25k基因突变产生的缺陷。研究结果为构建稳定的杆状病毒昆虫细胞表达系统提供了新途径。

【目的】为明确茉莉酸甲酯（methyl jasmonate, MeJA）的不同处理方式对昆虫生长和解毒代谢能力的影响，以及MeJA熏蒸处理昆虫对植物防御和昆虫解毒代谢之间关系的影响。【方法】本文比较了取食MeJA和MeJA熏蒸等两种处理对棉铃虫Helicoverpa armigera 3龄末幼虫生长和解毒代谢酶活性的影响，并系统研究了经MeJA熏蒸处理的棉铃虫3龄末幼虫，再取食经MeJA喷雾处理的棉叶，其中肠解毒酶活性的变化。【结果】取食MeJA和MeJA熏蒸两种不同处理，对棉铃虫幼虫的生长及解毒能力的影响有所不同。取食含2.9 μg/g MeJA的人工饲料显著抑制了棉铃虫的生长，同时诱导棉铃虫幼虫P450活性增加了1.92倍，而MeJA熏蒸虽然没有影响棉铃虫幼虫的生长，但MeJA熏蒸处理使棉铃虫幼虫P450活性和羧酸酯酶活性分别增加了2.94倍和1.16倍。经MeJA熏蒸处理后的棉铃虫幼虫，再取食正常的或经MeJA喷雾处理的棉叶，其幼虫P450活性显著增加，其中经MeJA熏蒸处理的棉铃虫，再取食经MeJA喷雾处理的棉叶，其P450酶显示了最高活性。【结论】MeJA熏蒸处理棉铃虫，不仅使棉铃虫中与P450酶相关的解毒能力显著增加，而且增加了棉铃虫对于MeJA所诱导的棉花防御反应的解毒能力。

【目的】通过对截形叶螨 Tetranychus truncatus Ehara抗哒螨灵品系体内解毒酶活性分析和增效剂与哒螨灵混用的增效作用测定，明确截形叶螨对哒螨灵的抗性动态及抗性机理，获得抗性治理的途径。【方法】采用室内生测法培育截形叶螨抗哒螨灵品系，微量滴度酶标板测定抗性和敏感品系体内解毒酶比活性、米氏常数（K_m）及最大反应速度（V_max），再用增效醚（PBO）、顺丁烯二酸二乙酯（DEM）和磷酸三甲苯酯（TPP）进行增效作用测定。【结果】室内筛选的截形叶螨对哒螨灵产生了抗性，筛选至49代，抗性倍数达到955.25；PBO，TPP和DEM对哒螨灵药剂有不同程度的增效作用，相对增效系数分别为95.97%, 85.14%和97.37%；抗哒螨灵品系体内的羧酸酯酶（CarE）、谷胱甘肽转移酶（GSTs）、多功能氧化酶（MFO）活性较敏感品系显著性提高（P＜0.05），酸性磷酸酯酶（ACP）和碱性磷酸酯酶（ALP）的活性与敏感品系差异不大(P>0.05)；抗性品系中的CarE，GSTs和MFO 3种解毒酶的米氏常数（K_m）下降，最大反应速度（V_max）高于敏感品系。【结论】截形叶螨对哒螨灵产生抗性可能与其体内CarE，GSTs和MFO 3种解毒酶与底物的亲和力提高和代谢能力增强有关；3种增效剂(PBO， TPP和 DEM)与哒螨灵混用能提高对截形叶螨的毒杀效果。

【目的】为了评估棉蚜Aphis gossypii Glover对吡虫啉的抗性风险，在室内进行了棉蚜对吡虫啉(imidacloprid)的抗性选育和抗性现实遗传力分析。【方法】采用单头反选育法和群体汰选法，分别得到了棉蚜对吡虫啉敏感品系(LC₅₀为0.176 mg/L)和抗性品系(LC₅₀为14.657 mg/L)。采用阈性状分析方法，获得棉蚜对吡虫啉的抗性现实遗传力（h²）。【结果】相对于田间原始种群(LC₅₀为0.346 mg/L)，吡虫啉敏感棉蚜品系对吡虫啉的LC50减少了2倍；获得的吡虫啉抗性棉蚜品系，经过40代的选育，得到抗性倍数为室内敏感品系的83.27倍的抗性品系。棉蚜对吡虫啉的抗性现实遗传力(h2)为0.1478。进一步预测其抗性发展速度，基于80%~90%的选择压力，预计抗性增长100倍时，吡虫啉可使用30.2~38.1代。【结论】这些研究说明棉蚜对吡虫啉存在抗性风险。

【目的】为探明不同水稻品种（丰源优272、R9810-T、华恢1号、明恢63、麻糯谷和Rathu Heenati）对白背飞虱Sogatella furcifera的抗性差异机理，利用刺吸电位技术(electronic penetration graph, EPG)记录了该虫在这6个品种三叶期稻苗上的取食行为。【方法】结合特定的EPG波形，考察了9个非韧皮部指标和22个韧皮部指标。【结果】在总记录时间8 h内，白背飞虱在品种Rathu Heenati上非刺探波np的总时间最长，其次是麻糯谷上非刺探波np的总时间，这两者间差异显著且都显著地长于其他4个品种的np总时间(P<0.05)；该虫在Rathu Heenati上路径波Nc的总时间为8 523.41 s，是感虫品种明恢63 Nc总时间的2.24倍；该虫在Rathu Heenati上吸食韧皮部汁液N4-b的总时间显著地比其他品种短(P<0.05)。华恢1号和R9810-T上所有的EPG指标和感虫品种明恢63的EPG指标都没有显著的差异(P≥0.05)。白背飞虱在丰源优272上单次分泌水溶性唾液N4-a的平均时间更长，并伴随长时间的韧皮部取食。【结论】由此推测，品种Rathu Heenati可能存在不利于白背飞虱取食的忌避成分，并且在韧皮部外组织和韧皮部组织都存在抗性因子；在麻糯谷上仅存在忌避成分；然而，品种华恢1号和R9810-T可能对白背飞虱不具有明显的抗性；丰源优272可能是比明恢63更为感虫的品种。结合介体昆虫取食行为与传播持久性病毒的关系，这些结果也为利用抗白背飞虱品种控制南方水稻黑条矮缩病提供了参考。

【目的】离腹寡毛实蝇属Bactrocera昆虫是最具经济重要性的实蝇类害虫，本研究依据mtDNA COI基因碱基序列对离腹寡毛实蝇属常见实蝇种类进行识别鉴定与系统发育分析。【方法】以口岸经常截获的离腹寡毛实蝇属8个亚属21种实蝇为对象，采用DNA条形码技术，通过对mtDNA COI基因片段 (约650 bp)的测序和比对，以MEGA软件的K2-P双参数模型计算种内及种间遗传距离，以邻接法(NJ) 构建系统发育树。【结果】聚类分析与形态学鉴定结果一致，除11种单一序列实蝇外，其他10种实蝇均各自形成一个单系，节点支持率为99%以上。种内（10种）遗传距离为0.0003~0.0068，平均为0.0043；种间（21种）遗传距离为0.0154~0.2395，平均为0.1540；种间遗传距离为种内遗传距离的35.8倍，而且种内、种间遗传距离没有重叠区域。【结论】基于mtDNA COI基因的DNA条形码技术可以用于离腹寡毛实蝇属昆虫的快速鉴定识别，该技术体系的建立对实蝇类害虫的检测监测具有重要意义。

顺式调控序列(cis-regularory sequences)是与基因表达调控相关、能够被调控因子特异性识别和结合的非编码DNA序列。顺式调控序列可以通过增减所含转录因子结合位点的数目，重构转录调控网络，以精准调控基因的时空表达模式，从而调控动物的生理和形态表型。顺式调控假说认为顺式调控序列进化是自然界丰富的动物表型进化的主要遗传机制。本文首先简述了顺式调控序列的结构和功能，然后重点讨论了近年来顺式调控序列进化调控果蝇表型进化如刚毛表型进化、色素沉积表型进化和胚胎发育方面的研究进展，阐释了顺式调控序列进化是动物表型进化的主要遗传机制之一。最后本文展望了顺式调控序列未来研究方向，例如应用功能基因组研究、开展ENCODE计划等，为进化发育生物学中顺式调控序列的研究提供了参考。

自复寄生蜂营雌雄异律发育，雌蜂为初级寄生蜂，雄蜂为复寄生蜂。依据寄主类型产下的相应性别的后代，其性比受到寄主数量、初级寄主与二级寄主的相对丰度等因素影响。自复寄生蜂能够寄生和取食初级寄主，抑制有害昆虫的种群数量，同时能够寄生和取食同种和异种寄生蜂幼虫，产生致死干扰竞争作用。复寄生二级寄主时，易感时间窗口主要集中在老熟幼虫至预蛹阶段。与同种二级寄主相比，自复寄生蜂更倾向于寄生异种二级寄主或无选择倾向性，取食时，更倾向于异种二级寄主。自复寄生蜂特殊的生殖方式使其对生物防治的影响备受争议。在评价其生物防治价值时，应对其正面影响和负面影响做出全面权衡。本文对自复寄生蜂的生殖特性、对同种和其他种类寄生蜂产生的致死干扰竞争作用及其对生物防治的影响等问题的国内外研究进展进行了综述，以期为利用这种天敌资源开展有害生物综合治理提供依据。

【目的】意大利蝗Calliptamus italicus L.是新疆荒漠、半荒漠草原的主要危害种类，前期研究表明其发生与新疆气候变暖显著相关，本研究进一步探讨气候变暖条件下意大利蝗的呼吸代谢适应机制。【方法】应用多通道昆虫呼吸仪测定了15， 20， 25， 30和35℃不同温度条件下意大利蝗成虫的呼吸率、代谢率、CO₂释放率、Q₁₀(每升高10℃呼吸率的变化幅度)及呼吸商并分析其变化特征。【结果】15℃时意大利蝗成虫的呼吸率、代谢率、CO₂释放率均显著低于其他温度（P<0.01）， 35℃时3项指标值显著高于其他温度（P<0.01），表明低于15℃和高于35℃的温度条件都对意大利蝗的呼吸代谢产生明显影响；在20~30℃之间，意大利蝗的呼吸率、代谢率及CO2释放率变化幅度小且平稳，差异均不显著（P>0.01），表明该温度范围是意大利蝗生长发育的适宜温度条件。不同温度下意大利蝗呼吸率的Q₁₀值显示， 20~30℃温度范围内的 Q₁₀值最小，为1.03， 15~25℃的Q10值为1.43， 25~35℃的Q10值最大，为2.42，说明意大利蝗的呼吸代谢活动对温度变化敏感，并表明20~30℃是意大利蝗生长发育的适宜范围。各温度条件下意大利蝗呼吸商的差异不显著（P>0.01），平均为0.9450，判断意大利蝗呼吸代谢消耗的底物主要为糖类物质。【结论】意大利蝗生长发育的适宜温度范围是20~30℃，预示着在气候持续变暖背景下，意大利蝗仍将是新疆草原最重要的生物灾害之一。

【目的】二点委夜蛾Athetis lepigone  (Moschler)是我国夏玉米苗期的新害虫，随着耕作制度的改变，二点委夜蛾的发生危害区域和面积逐渐扩大。本研究探讨二点委夜蛾的抗寒能力，为揭示抗寒机理提供理论基础。【方法】分别在越冬期的3个不同阶段，即越冬初期（2012年11月7日）、越冬期（2012年1月20日）和越冬末期（2013年3月5日），对二点委夜蛾老熟幼虫的体重、过冷却点（supercooling point, SCP）、结冰点（freezing point, FP）、含水量、脂肪和糖原含量进行测定。【结果】过冷却点在这3个时期有显著差异，最低值（-23.16±0.38℃）出现在1月份，最高值（-16.24±1.24℃）出现在越冬初期，结冰点变化趋势与过冷却点一致。通过定量检测发现，虫体鲜重与过冷却点无相关性（r=0.17, P=0.12）；脂肪含量在越冬初期含量最高，而在越冬末期最低；糖原含量在越冬期含量最低；自由水的含量随着过冷却能力升高而降低，随其降低而升高，而结合水含量恰好相反。【结论】二点委夜蛾的抗寒性在越冬期不同阶段出现明显的变化，即随着冬季低温的到来，其抗寒能力逐渐增强，冬季过后又随气温的回升，其抗寒力逐渐减弱。